硕士生物仪器分析之紫外-可见光谱.pptVIP

光谱和谱学分析 Spectroscopy and Spectral Analysis;Introduction;Introduction;部分电磁辐射范围 远紫外 100~200 nm 近紫外 200~400 nm 可见光 400~800 nm 近红外 800~2500 nm 远红外 2500~3500 nm;谱图范围的选择，决定了仪器采用的光学组件;紫外－可见光谱;紫外线;紫外线;紫外线;优点： 消毒杀菌； 促进骨骼发育； 对血色有益； 偶尔可以治疗某些皮肤病; 紫外线照射直接影响人体维生素D的合成 　　;紫外线的应用;UV-vis spectroscopy is the measurement of the wavelength and intensity of absorption of near-ultraviolet and visible light by a sample.;UV-vis spectroscopy is usually applied to molecules and inorganic ions or complexes in solution.;分子从电子基态（S0）跃迁到电子激发态（SE）的?E远大于振动能级及转动能级的?E。 电子跃迁所吸收的电磁波是吸收光谱中频率最高的，即紫外可见光。;基本原理（Basic principle）;吸收频率决定于分子的???级差，其计算式为： ?E = hυ 或 ?E = hC /λ 式中 ?E为分于跃迁前后能级差； υ、λ分别为所吸收的电磁波的频率及波长； C为光速； h为普朗克常数。;紫外吸收谱带的形状：较宽;The concentration of an analyte in solution can be determined by measuring the absorbance at some wavelength and applying the Beer-Lambert Law. ;UV/VIS spectroscopy in microplates (or 96 well) ;水 乙腈 n-Hexane 正己烷 Isooctane 异辛烷 Cyclohexane 环己烷 95%乙醇 Methanol 甲醇 Ethyl ether 乙醚 Dioxane 1,4-二氧六环 三甲基磷酸酯 Chloroform 氯仿;生色团 (chromophore)：产生紫外(或可见)吸收的不饱和基团，如C＝C、C＝O、NO2等。 助色团 (auxochrome)：其本身是饱和基团(常含杂原子)，它连到生色团时，能使后者吸收波长变长或吸收强度增加(或同时两者兼有)，如：OH、 NH2、Cl等。 深色位移 (bathochromic shift)：由于基团取代或溶剂效应，最大吸收波长变长。深色位移亦称为红移(red shift)。 浅色位移 (hypsochromic shift)：由于基团取代或溶剂效应，最大吸收波长变短。浅色位移亦称为蓝移(blue shift)。 增色效应 (hyperchromic effect)：使吸收强度增加的效应。 减色效应 (hypochromic effect)：使吸收强度减小的效应。;;;;;B. 共轭醛、酮紫外吸收(K带)的计算;各类化合物的紫外吸收;各类化合物的紫外吸收;;;各类化合物的紫外吸收;;;各类化合物的紫外吸收;;紫外谱图的解析;紫外可见分光光度仪;;.au/creswick/facilities/analyt_lab.html;single beam uv-vis spectrophotometer ;dual-beam uv-vis spectrophotometer;;单波长标准系数法 双波长等吸收点法 双波长系数倍率法 三波长法;在决定一系列维生素、抗菌素及一些天然物结构曾起过重要作用，如维生素A1、A2、B12、B1、青霉素、链霉素、土霉素、萤火虫尾部的发光物质（是由荧光酶(luciferase)作为酶催化底物分子荧光素(luciferin)）等。 紫外吸收光谱用来决定双键的位置，既简单又有效，例如： ;For the spectrum on the right, a solution of 0.249 mg of the unsaturated aldehyde in 95% ethanol (1.42 ? 10-5 M) was placed in a 1 cm cuvette for measurement. Using the above formula, ε = 36,6