荧光分析法的应用.ppt

第三章 分子发光分析法 第一节 分子发光法概述 一、分子发光（Molecular Luminescence）： 基态分子吸收了一定能量后，跃迁至激发态，而激发态分子以辐射跃迁形式将其能量释放返回基态时，产生分子发光。 二、分子发光的类型： 1.按激发的模式分类 2.光致发光按激发态的类型分类 荧光分析法其特点： 1.灵敏度高；检测限比吸收光谱法低1-3个数量级，通常在ppb级。 2.取样量少，操作简单。 3.选择性比吸收光谱法好，能产生紫外-可见吸收的分子不一定发射荧光或磷光。 荧光分析法的应用： 在药物、临床、环境、食品的微量和痕量分析以及生命科学研究各个领域都具有重要的意义。 分子发光分析法属于分子发射光谱法的范畴，具有较高的检测灵敏度，在有机大分子和生物大分子分析中有重要应用，在药物、临床、环境、食品的微量和痕量分析以及生命科学研究各个领域都具有重要的意义。特别是激光诱导荧光分析法因具有超高灵敏度而倍受关注。 回顾几个基本概念 反磁性分子： 分子电子自旋成对的结果为S=0。 单重态 若一个分子所有的电子自旋是成对的S=0 ，那么这个分子所处的电子能态称单重态。 有机分子中的电子多为偶数，则分子中的总自旋量子数S=0，即基态分子内的电子是自旋成对的。根据谱线多重度的定义M=2S+1=0，此时这个分子所处的电子能态称为单重态。 若电子在激发态与在基态的自旋方向相同，则激发态仍是单重态，此为激发单重态。 三重态:若在激发过程中电子自旋方向改变，即与基态时的自旋方向相反，变为平行状态，则S=1/2+1/2=1，M=2S+1=3，这样的激发态为三重态。 由于自旋平行比自旋相反的状态稳定，同一激发态中，三重态的能级比相应单重态的能级低。 一荧光与磷光的产生过程 （一）分子荧光的产生 1、分子发光 室温下，大多数分子处于基态的最低振动能层。处于基 态的分子吸收能量后被激发为激发态。激发态不稳定，将很 快衰变到基态。若返回到基态时伴随着光子的辐射，这种现 象被称为“发光”。 2、激发单重态S与激发三重态T 处于分子基态单重态的一个电子被激发时，通常跃迁至 第一激发单重态的能级轨道上，也可能跃迁至能级更高的单 重态上，这种跃迁是符合光谱选律。如果跃迁至第一激发三 重态轨道上，则属于禁阻跃迁。 3、分子荧光（磷光）产生示意图 每个分子具有一系列严格分立的能级，称为电子能级，每个电子能级中又包含了一系列的振动能层和转动能层。图中基态用S0表示，第一电子激发单重态和第二电子激发单重态分别用S1、S2表示，0、1、2、3?表示基态和激发态的振动能层（见下图），第一、二电子的激发三重态分别用T1和T2表示。 4、常用术语 （1）振动弛豫：在同一电子能级上，分子由较高振动能 级向该电子态的最低振动能级的非辐射跃迁，其过程速率极 大，在10－14～10－12内即可完成。 （2）内转化：相同多重态的两个电子态之间（如S2 S1） 的非辐射跃迁，其转化速率取决于两能级之间的能量差，相 邻单重激发态之间能级较近，其振动能级常发生重叠，内转 化很快。 在通常情况下，分子被激发到任一个电子激发态，经内 转化和振动弛豫都会跃迁至最低电子激发态的最低振动能级 上，而且时间极短(10－13~10－11)。 （5）磷光的产生 处于激发三重态的分子跃迁返回基态时所产生的辐射。在同样的分子轨道上，处于三重态分子能量低于相应单重态分子（为什么？），再加上体系间的窜跃和振动弛豫消耗光子的能量，那么其磷光l3 ，大于所发出的荧光l 3。且这种跃迁属于禁阻跃迁，其发光速率较慢，因而磷光较之荧光有较长的寿命，当激发光停止后，荧光立即消失，而磷光则将持续一段时间（10－4～1s）。 光致发光的主要过程 第二节 分子荧光分析法 一、 荧光光谱 1. 荧光光谱的产生 2. 荧光光谱的基本特征 3. 荧光效率和荧光物质 4. 影响荧光强度的环境因素 5. 化合物的结构与荧光 1. 荧光光谱的产生 分子吸收辐射后可能激发为第一电子激发态（或更高激发态）的任一振动能级，这种激发态分子以热的形式损失其振动能后下降为第一电子激发态的最低振动能级（无辐射跃迁）；然后再以辐射的形式跃迁为电子基态的任一振动能级，即产生荧光，并进一步以无辐射跃迁形式回到基态的最低振动能级。 二 分子荧光的性质 荧光和磷光都属于光致发光