实验八---玻璃器皿的清洗包扎、培养基的制备及灭菌.pptVIP

实验八 玻璃器皿的清洗包扎， 培养基的配制及灭菌 　一、目的要求 1、了解玻璃器皿的清洗、棉塞制作、移液管和培养皿的包扎方法； 2、掌握培养基的制备原理和方法； 3、掌握干燥灭菌、湿热灭菌的原理和方法。 二、基本原理 （一）实验室中使用的玻璃器皿简介 微生物学实验所用的玻璃器皿，大多要进行消毒、灭菌和用来培养微生物，因此对其质量、洗涤和包装方法均有一定的要求。玻璃器皿的质量一般要求硬质玻璃，才能承受高温和短暂灼烧而不致破坏；玻璃器皿的游离碱含量要少，否则会影响培养基的酸碱度；对玻璃器皿的性状和包装方法的要求，以能防止污染杂菌为准；洗涤玻璃器皿的方法不当也会影响实验的结果。目前微生物学实验室中，有些玻璃器皿（如培养皿、吸管等）已被一次性塑料制品所代替，但玻璃器皿仍是重要的实验室用具。 清洗 包装 灭菌 二、基本原理 （二）培养基简介 培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，用以培养、分离、鉴定、保存各种微生物或积累代谢产物。 在自然界中，微生物种类繁多，营养类型多样，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多。 培养基的成分和pH 不同种类的培养基中，一般应含有水分、碳源、氮源、无机盐和生长因子等。不同微生物对pH要求不一样，霉菌和酵母的培养基的pH一般是偏酸性的，而细菌和放线菌培养基的pH一般为中性或微碱性的（嗜碱细菌和嗜酸细菌例外）。所以配制培养基时，都要根据不同微生物的要求将培养基的pH调到合适的范围。 实验室常用的灭菌方法有干热灭菌法、高压蒸汽灭菌法、紫外线照射法和微孔滤膜法等。 干热灭菌和高压蒸汽灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。 紫外线杀菌机制主要是因为它诱导了胸腺嘧啶二聚体的形成和DNA链的交联，从而抑制了DNA的复制。 过滤除菌是通过机械作用滤去液体或气体中细菌的方法。 高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。 紫外线灭菌是用紫外线灯进行的，波长为200—300nm的紫外线都有杀菌能力，其中以260nm的杀菌力最强。在波长一定的条件下，紫外线的杀菌效率与强度和时间的乘积成正比。紫外线杀菌机制主要是因为它诱导了胸腺嘧啶二聚体的形成，从而抑制了DNA的复制。另一方面，由于辐射能使空气中的氧电离成[O]，再使O2氧化生成臭氧（O3）或使水（H2O）氧化生成过氧化氢（H2O2），O3和H2O2均有杀菌作用。紫外线穿透力不大，所以，只适用于无菌室、接种箱、手术室内的空气及物体表面的灭菌。紫外线灯距照射物以不超过1．2m为宜。 　 此外，为了加强紫外线灭菌效果，在打开紫外线灯以前，可在无菌室内（或接种箱内）喷洒3—5％的石炭酸溶液，一方面使空气中附着有微生物的尘埃降落，另一方面也可以杀死一部分细菌。无菌室内的桌面，凳子可用2—3％的来苏尔擦洗，然后再开紫外线灯照射，即可增强杀菌效果，达到灭菌目的。 灭菌在微生物实验操作中的重要意义 在微生物实验中，需要进行纯培养，不能有任何杂菌污染，因此对所用器材、培养基和工作场所都要进行严格的消毒和灭菌。消毒与灭菌不仅是从事微生物学和整个生命科学研究必不可少的重要环节和实用技术，而且在医疗卫生、环境保护、食品、生物制品等各方面均具有重要的应用价值。 三、实验器材 溶液和试剂：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、可溶性淀粉、KNO3、K2HPO4·3H2O、MgSO4·7H2O、FeSO4·7H2O、KH2PO4、葡萄糖、孟加拉红（1%的水溶液）、链霉素（1%的水溶液）、1mol/L NaOH、1mol/L HCl。 仪器和其他用品：试管、三角烧瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、培养基分装器、天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅、pH试纸（pH5.5～9.0）、棉花、牛皮纸（或铝箔）、记号笔、麻绳和纱布等。 四、操作步骤 （以配制乳糖蛋白胨液体培养基为例） 实验教材P246 四、操作步骤 （以配制乳糖蛋白胨液体培养基为例） 实验教