SARS亚基疫苗-突刺蛋白受体结合区RBD在烟草叶.PDFVIP

920 生 物 工 程 学 报 钟雪 等/SARS 亚基疫苗-突刺蛋白受体结合区RBD 在烟草叶绿体中的高效表达 Chinese Journal of Biotechnology /cjbcn June 25, 2014, 30(6): 920−930 DOI: 10.13345/j.cjb.130488 ©2014 Chin J Biotech, All rights reserved 农业生物技术 SARS 亚基疫苗-突刺蛋白受体结合区RBD 在烟草叶 绿体中的高效表达 1,2* 1* 1 1 2 1 钟雪 ，齐广勋 ，杨静 ，邢国杰 ，刘剑锋 ，杨向东 1 吉林省农业科学院农业生物技术研究所，吉林 长春 130033 2 吉林师范大学生命科学学院，吉林 四平 136000 钟雪, 齐广勋, 杨静, 等. SARS 亚基疫苗-突刺蛋白受体结合区RBD 在烟草叶绿体中的高效表达. 生物工程学报, 2014, 30(6): 920−930. Zhong X, Qi GX, Yang J, et al. High-efficiency expression of a receptor-binding domain of SARS-CoV spike protein in tobacco chloroplasts. Chin J Biotech, 2014, 30(6): 920−930. 摘 要: 叶绿体表达系统为植物源重组药用蛋白和亚基疫苗的生产提供了一个有效的途径。为验证 SARS 亚 基疫苗在叶绿体中表达的可行性，以及为植物源 SARS 亚基疫苗的生产提供一套高效、低成本的技术平台，本 研究将人工优化合成的 SARS-CoV 突刺蛋白 (S 蛋白) 受体结合区序列RBD 与载体分子CTB 融合基因导入烟 草叶绿体基因组中。PCR 和 Southern 杂交分析表明，外源融合基因已整合到烟草叶绿体基因组中，并获得同 质化。Western 杂交分析表明，重组融合蛋白 CTB-RBD 在叶绿体转基因烟草中获得表达，且主要以可溶性单 体形式存在。ELISA 分析表明，在不同生长阶段、不同生长部位和不同时间点烟草叶片中，重组融合蛋白 CTB-RBD 的表达水平呈现明显的变化。重组蛋白在成熟叶片中的表达水平最高可以达到10.2% TSP。本研究 通过 SARS 亚基疫苗RBD 在烟草叶绿体中的高效表达，有望为植物源 SARS 亚基疫苗的生产以及SARS 血清 抗体的检测提供一个有效的技术平台。 关键词: 突刺受体结合区RBD ，SARS ，植物源亚基疫苗，叶绿体表达系统 Received: September 18, 2013; Accepted: December 9, 2013 Supported by: National Natural Science Foundation of China (No., Innovation Program of Jilin Academy of Agriculture Sciences. Corresponding author: Xiangdong Yang. Tel: +86-431 E-mail: xdyang020918@126.com. * These authors contributed equally to this st