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基因诊断与产前诊断中常用的分子生物学技术 张淑杰 Commonly used Techniques PCR 聚丙烯酰胺凝胶电泳 DNA测序 MLPA 基因芯片 PCR 实验原理 实验步骤 PCR实验原理： PCR (Polymerase chain reaction)即聚合酶链式反应，是指在DNA聚合酶催化下，以母链DNA为模板，以特定引物为延伸起点，通过变性、退火、延伸等步骤，体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA的过程。是一项DNA体外合成放大技术，能快速特异地在体外扩增任何目的DNA。 PCR实验步骤： 变性（Denaturation） 将待扩增DNA模板加热，一般变性温度为95℃，双链DNA变性成为单链DNA。 退火（Anealing） 两条引物分别与两条DNA的两翼序列特异性结合——复性。退火温度（Tm）与引物序列的碱基组成、长度相关。 延伸 ( Extention) 在适合的条件下，由Taq(或其他)DNA聚合酶催化引导DNA合成，即引物的延伸。延伸的温度一般是72℃， 这种热变性—复性—延伸的过程就是一个PCR循环。 目的片段的指数扩增 PCR反应体系（终体积20~100ul）： 10×PCR缓冲液 1/10体积 2mmol/L dNTP 1/10体积 引物