含硫树脂的制备及在谷胱甘肽分离中的应用-北京化工大学学报.PDFVIP

第 34 卷 第 3 期 北 京 化 工 大 学 学 报 Vol. 34 , No. 3 2007 年 JOURNAL OF BEIJ IN G UN IV ERSIT Y OF CHEMICAL TECHNOLO GY 2007 含硫树脂的制备及在谷胱甘肽分离中的应用 赵 　睿1 ,2 　王满意1 ,2 　周 　鑫1 ,2 　谭天伟 1 ,2 (北京化工大学 1. 生命科学与技术学院;2. 北京市生物加工过程重点实验室 , 北京 　100029) 摘 　要 : 利用大孔苯乙烯树脂改性合成含硫树脂 ,考察了修饰条件对谷胱甘肽吸附的影响 。并对其在谷胱甘肽分 离中的应用进行了研究 。结果表明采用 p H3 0 的缓冲液进行吸附 , 自制的含硫树脂最大吸附容量可达 22 mg/ g 湿 树脂 ,选择质量浓度为 0 5 %的NaOH 溶液洗脱 GSH ,解吸率可达 70 %以上 。采用真实发酵液进行分离纯化 ,收率 为 35 % ,纯度可达 90 %以上 。 关键词 : 含硫树脂 ; 修饰 ; 谷胱甘肽 中图分类号 : O658 质[1011 ] ,但还未见采用含硫树脂分离小肽的报道 。 引　言 本文发现利用硫脲功能化的大孔苯乙烯树脂能 ( ) 谷胱甘肽 Glutathione , GSH 是谷氨酸 、甘氨酸 特异性吸附谷胱甘肽 ,从而制备出一种分离谷胱甘 和半胱氨酸组成的具有重要生理功能的天然活性三 肽的新介质 。实验对树脂的改性以及静态吸附条件 肽 ,GSH 是生物体重要的非蛋 白巯基化合物之一 , 进行了摸索 ,通过对吸附容量及解吸率的研究 ,确定 广泛存在于动物 、植物和微生物细胞中。还原型的 了谷胱甘肽在该树脂上的最佳吸附和解吸条件 ,并 谷胱甘肽在生物体 内有还原性和解毒等生理功 用实际发酵液体系进行了色谱纯化验证 。 能[1 ] ,因此被广泛用于食品、医药等领域 。 还原型 GSH 的生产主要采用酵母发酵[2 ] , 由于 1 　实验部分 发酵液中杂质种类和数量多 ,因此对分离 GSH 的方 11 　药品与仪器 法要求也较高 。铜盐法[3 ] 及汞亲和树脂法[45 ] 分离 ( ) ( ) L谷胱甘肽 还原型 ,三氟乙酸 TFA 购 自德 GSH ,收率均达可到 80 % ,但残留的铜 、汞等重金属 国Merck 公司 ; 其余试剂均为分析纯 ,购 自北京化 离子会对 GSH 造成污染 , 不宜应用在食品医药领 学试剂公司 ;氯甲基化大孔苯乙烯树脂购 自浙江争 域 。离子交换法[6 ] 经济效益较高 , 但操作步骤多 , 光树脂厂 ;谷胱甘肽发酵液由本实验室自制 。 收率只有 60 % ;有报道采用双水相分配结合温度诱 A KTA 制备系统购 自英国 Amersham 公司 ; 电 导法分离谷胱甘肽 ,收率可达 80 % ,但是 GSH 与蛋 子天平型号为BS210S 购 自北京赛多利斯天平有限 白质 ,氨基酸的分离效果不理想[7 ] 。比较以上几种 公司 ;搅拌器购 自德国 IKA 公司 ,Alltech 426 高效 分离方法发现 ,分离纯度不高是这几种方法普遍存 液相色谱系统购 自美国Alltech 公司 。 在的问题 ,而本文制备的树脂对 GSH 的分离纯度可 12 　HPLC 分析方法