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单克隆抗体技术;提纲; 1975年英国科学家将产生抗体的B淋巴细胞同肿瘤细胞融合,成功建立了单克隆抗体技术,而获得1984年诺贝尔医学和生理学奖。
每个B淋巴细胞仅专一地产生、分泌一种针对某种抗原决定簇的特异性抗体,而肿瘤细胞可以无限增殖,因此杂交瘤细胞可在体外培养或移植到体内条件下分泌大量单克隆抗体。
单克隆抗体技术的最主要优点是可以用不纯的抗原分子大量制备纯一的单克隆抗体。;单克隆抗体
(monoclonal antibody, McAb); B淋巴细胞在抗原的刺激下,能够分化、增殖形成具有针对这种抗原分泌特异性抗体的能力。将这种B细胞与非分泌型的骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞,再进一步克隆化,这种克隆化的杂交瘤细胞是既具有瘤的无限生长的能力,又具有产生特异性抗体的B淋巴细胞的能力,将这种克隆化的杂交瘤细胞进行培养或注入小鼠体内即可获得大量的高效价、单一的特异性抗体。这种技术即称为单克隆抗体技术。;杂交瘤技术;单克隆抗体制备原理;单克隆抗体制备原理 ;;单克隆抗体的制备步骤 ;2. 免疫动物;为什么要反复注射抗原??;3. 骨髓瘤细胞的准备;4. 细胞融合; 在体外的细胞培养中,单个的或数量很少的细胞不易生存与繁殖,必须加入其它活的细胞才能使其生长繁殖,加入的细胞称之为饲养细胞(Feeder cell)。在细胞融合和单克隆的选择过程中,就是在少量的或单个细胞的基础上使其生长繁殖成群体,因此在这一过程中必须使用饲养细胞。; 许多种类的动物细胞都可以做饲养细胞,如正常的脾细胞、胸腺细胞、腹腔渗出细胞等,常选用腹腔渗出细胞,其中主要是巨噬细胞和淋巴细胞。应用腹腔渗出细胞的好处是:一方面做饲养细胞,另一方面巨噬细胞可以吞噬死亡的细胞和细胞碎片,为融合细胞的生长造成良好的环境。腹腔细胞的来源可以是与骨髓瘤细胞同系鼠。
;细胞融合方式;5. 杂交瘤细胞及阳性孔的筛选;6.阳性孔的特异性检测及特异性阳性孔的克隆 ;阳性孔的检测;7. 单克隆抗体的制取;杂交瘤细胞的冻存;单克隆抗体的特性;四、单克隆抗体靶向技术与靶向单抗应用 ;应用:
——特异??溶解血栓药物
——抗肿瘤药物
——其它药物
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