甲醛炎性痛诱导大鼠脊髓HO-1蛋白表达增加及其促痛作用研究-病理学与病理生理学专业论文.docxVIP

河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺 河北医科大学 学位论文使用授权及知识产权归属承诺 本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。 本学位论文研究所获的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。 河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学 位论文主要内容相关的论文，第一署名单位为河北医科大学，试验材 料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则， 承担相应的法律责任。 研究生签名：撕导师签名：多俺学院领导签名： 豳 al|叨8年=≥月≥S日 河北医科大学 研究生学位论文独创性声明 本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了 文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰 写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写， 文责自负。 研究蚴：卿聊躲勃粤 跏D8年3月谱日 中文摘要甲醛炎性痛诱导大鼠脊髓HO．1蛋白表达增加及其 中文摘要 甲醛炎性痛诱导大鼠脊髓HO．1蛋白表达增加及其 促痛作用研究 摘 要 目的：内源性一氧化碳(Carbon monoxide，co)作为一种 新型神经递质已经被大家所公认。血红素氧合酶(Heme oxygenase，HO)是生成CO的限速酶，广泛分布于中枢神经 系统，其催化亚铁血红素Heme产生CO、游离铁和胆绿素， 胆绿素在胆绿素还原酶的作用下进一步生成胆红素。HO．1 为HO的一种亚型，正常时在神经系统表达较少，但可被多 种因素所诱导表达。 我室已往的研究已证实，甲醛炎性痛时脊髓后角一氧化 氮合酶(Nitricoxide synthase，NOS)活性增加，一氧化氮 (Nitrogen monoxidum，NO)产生增多。研究结果证实，NOS／NO 和HO／CO两个系统之间存在密切的联系。有关HO／CO系统 在脊髓伤害性信息传递和痛觉过敏方面作用的研究已有一 些报道，研究发现，结扎坐骨神经引起的神经损伤可诱导脊 髓HO表达增多，CO产生增多，但甲醛炎性痛引起的伤害 性信息传入是否会诱导脊髓HO．1表达发生改变尚未见相关 报道。 有研究证实，鞘内给予H0抑制剂可剂量依赖性地减轻 甲醛炎性痛大鼠自发痛行为，表明脊髓后角产生的CO在伤 害性信息传递和痛感觉方面发挥重要作用，但有关H0和CO 在热痛觉过敏和机械痛敏形成中作用尚无定论，有待进一步 的研究加以确定。 中文摘要因此，本实验采用免疫组织化学方法，观察大鼠足底注 中文摘要 因此，本实验采用免疫组织化学方法，观察大鼠足底注 射甲醛引起的炎性痛过程中，脊髓后角HO。l蛋白表达改变 及其时间特征。通过甲醛炎性痛大鼠鞘内注射HO的抑制剂 锌原卟啉(zinc protoporphyrin，Znpp)，观察其对甲醛炎性痛 大鼠的自发痛行为以及对热和机械痛觉过敏的影响：通过正 常大鼠鞘内注射HO激动剂氯化血红素(Hemin)，观察其对正 常大鼠热和机械痛闽的影响，探讨HO／CO在痛觉过敏形成 中的作用。 1甲醛炎性痛诱导脊髓HO．1蛋白表达改变 42只雄性Sprague-Dawley大鼠，体重250士20克，随机 分为7组，分别为正常对照组(control组)、甲醛6h组、甲醛 12h组、甲醛ld组、甲醛2d组、甲醛3d组、甲醛7d组， 每组6只动物。Control组不做任何处理，直接断头取材。甲 醛各组动物均于足底注射甲醛后行痛反应评分，然后于相应 时间点断头取腰5脊髓节段(L5)，石蜡切片上行HO．1免疫 组化染色。 结果发现：大鼠右后足底注射甲醛后，即刻出现舔、摇、 和抬高注射足等自发痛行为，且注射部位出现红、肿等明显 的炎症反应，注射足出现典型的双向性自发缩足反应，持续l h以上。 免疫组化检测结果发现，Control组大鼠脊髓HO．1免疫 反应阳性细胞在脊髓后角及中央管周围仅有极少量分布。足 底注射甲醛后，双侧L5脊髓后角均可观察到HO．1免疫反应 阳性细胞数目即有所增多，双侧无差别。足底注射甲醛后6h， 注射足同侧的L5脊髓后角可观察到HO．1免疫反应阳性细胞 中文摘要数目即有所增多，阳性面积增大，而灰度值未见明显降低， 中文摘要 数目即有所增多，阳性面积增大，而灰度值未见明显降低， 中央管周围阳性细胞数目也明显增多；足底注射甲醛后12h 时，脊髓后角免疫反应阳性细胞数目进一步升高和阳性面积 进一步增大，中央管周围阳性细胞数进-_步增多；ld时脊髓 后角及中央管周围HO．1阳性细胞数、阳性面积及灰度值均 达到峰值，7d时仍高于正常对照组水平。 2 Ho／CO在甲醛诱导的自发痛及痛觉过敏中的作用 45只雄性Sprague．Dawley大鼠，体重250i20克，随机 分为两个大组。 第一组又分为5个亚组，分别为正常对照组(control组)、 甲醛组(