甲醛表观遗传毒性及其机理的初步研究-生化及分子生物学专业论文.docxVIP

⑧ ⑧ 硕士擘位论丈 MASTER’S THESIS 录的主要途径。可见MeCPs将DNA甲基化和组蛋白修饰紧密地联系起来。MeCP2 是第～个发现的真正能够选择性识别甲基化的CbG的蛋白质家族的成员，它是一个 分子量大约为55000的染色体相关核蛋白。与MeCPl不同，MeCP2只需与1个甲基化 CpG位点结合就能发挥抑制转录的作用，并且MeCP2含有2个结构域，即染色体定 位必需的甲基化CpG结合结构域和在一定距离内可抑制启动子转录的转录抑制结构 域(TRD)，因而它抑制转录的作用就比较强。 近年来，关于室内空气甲醛污染与人体健康效应的研究日益广泛深入。甲醛是 室内环境污染的“罪魁祸首”之一，属于A2类化合物(可疑的人类致癌物)，具有 很强的遗传毒性， 如造成DNA的氧化损伤、DNA一蛋白质交联(DNA-protein crosslink，DPC)等。甲醛是否可以通过改变基因调控，导致肿瘤抑制基因过甲基化， 使细胞无限增殖，以外遗传机制作用致癌呢?本课题就甲醛对d．nmt和mecp2基因的 调控作用进行了体内和体外实验，实验结果如下： 1．甲醛所致Hela细胞mecp2和dnmts基因mRNA水平的改变 为研究甲醛对培养细胞mecp2和dmnts基因mRHA水平的改变作用，将Hela 细胞暴露于50#moFL、250／tmol／L、1250／tmol／L三组不同浓度液态甲醛中，染毒 lh，然后采用RT-PCR二步法检测细胞中me．p2和d_nmts基因mRNA水平。结果表 明，甲醛可依剂量一效应曲线的方式激活meep2基因。其中，高浓度甲醛(1250#mol／L) 可极显著性上调mecp2基因mRNA水平(与0／肛nol／L相比，p0．01)。同时，高浓度 的甲醛也可极显著性上调dnmt3b基因pO．01)和显著性上调dnrml基因(FO．05)的 mRNA水平。这些结果提示，同一浓度染毒情况下，甲醛可以通过极显著上调dnmt3b 和mecp2基因，来造成肿瘤抑制基因的过甲基化，进而有可能引发癌症。 2．气态甲醛所致小鼠肺部mecp2幂fldnmts基I丢ImRNA水平的改变 为进一步证实气态甲醛对肺组织中meep2和dnmts基因mRNA水平有上调作 用，进而引发癌症。我们选取3．0 mg／m3浓度的甲醛对昆明小鼠进行了72h仿真环 境模型染毒，雄性昆明小鼠随机分为2组，对照组在同样的染毒缸中吸入经过滤的 新鲜空气，暴露结束后立即采用RT-PCR检测肺组织中mecp2和drmats基因mRNA 水平。结果显示，3．0mg／m3甲醛暴露小鼠与对照组小鼠相比，甲醛可以极显著上调 肺部dnmtl和dnmt3b基因mRNA水平◇O．01)，同时显著上调mecp2基因mRNA 水平07o．05)。这提示气态甲醛可以通过改变基因调控，导致肿瘤抑制基因过甲基 化，使细胞无限增殖，以外遗传机制作用致癌。 关键词：外遗传，甲醛，DNA甲基转移酶，甲基结合蛋白，基因表达 AbstractEpigenetie Abstract Epigenetie gene regulation by DNA methylafion and associated factors is essential for mammalian development and also plays a major role in tumorigenesis．DNA methylafion is the most common enkaryotic DNA modification and iS onc of the epigenetic(alteration in gene expression without a change in nucleotide sequence) phenomena．Genome stability，allele-specific expression ofimprinted genes and masking of transposous and X chromosome inactivatiOn are all clearly dependem of cytosine methylation．The effect of DNA methyla／ion to oncogenesis appears tO be important in current aehievement$．DNA methylation in eukaryotes involves addition of a methyl group to the carbon 5 position of the cytosine ring．T1lis reaction is cat