黄体酮对脑梗死大鼠相关凋亡途径的影响-神经病学专业论文.docxVIP

摘要黄体酮对脑梗死大鼠相关凋亡途径的影响 摘要 黄体酮对脑梗死大鼠相关凋亡途径的影响 研究生朱中君 导师王建平教授 郑州大学第五附属医院神经内科 河南 郑州450052 摘要 背景和目的 脑血管疾病(cerebrovascular diseases，CVD)以高发病率、高死亡率及高致残率 而严重危害人类的健康，已成为引起人类死亡的三大原因之一。脑梗死(cerebral infarction)，占到全部脑卒中的70％．80％。脑缺血后的病理机制异常复杂，涉及 兴奋性氨基酸的神经毒性、细胞内Ca2+超载、氧化应激、炎症反应、细胞凋亡 等许多方面，其中细胞凋亡是脑缺血病理作用的重要环节，是造成缺血后继发 性脑损害的重要机制，细胞凋亡则是神经元继发性或迟发性死亡的主要形式， 其可能决定了最终梗死体积的大小。因此，寻找与发现阻断缺血区周围神经元 的凋亡的方法，对于恢复缺血后半暗带区神经元的活力，降低缺血性脑血管病 患者的死亡率或致残率有重要意义。 细胞凋亡主要涉及两条途径：caspase依赖的凋亡途径和非caspase依赖的凋 亡途径。在caspase依赖的凋亡途径，caspase是执行凋亡的关键因子，X．连锁凋 亡抑制蛋白(X．1inked inhibitor of apoptosis protein，XIAP)是凋亡抑制蛋白家族中 最重要的caspase抑制物之一，XIAP通过抑制启动因子caspase．9和效应因子 caspase．3和．7，抑制凋亡的发生。凋亡诱导因子(apoptosis inducing factor，AIF) 是调控非caspase依赖的凋亡途径的重要蛋白之一，具有强大的促凋亡活性。 目前对于脑梗死的治疗除了超早期溶栓治疗外尚缺乏有效的治疗方法，许多 理论上有效的药物因其副作用大或临床效果有限而在临床上失败。因此，临床 上急需寻找一种安全、有效的，能够降低脑缺血所引起的兴奋性氨基酸毒性、 氧化应激、炎症、凋亡、钙超载的药物。临床和流行病学证据显示中风的发生 与预后有一定的性别差异，且脑缺血后细胞死亡的机制在不同性别之间办存在 摘要差异，这种差异引起人们对雌激素和黄体酮的脑保护作用的注意。越来越多的 摘要 差异，这种差异引起人们对雌激素和黄体酮的脑保护作用的注意。越来越多的 证据显示：黄体酮在脑卒中和脑外伤试验中有明显的神经保护作用，能明显减 轻脑损伤程度，但其作用机制尚不完全清楚。 为了进一步探讨黄体酮的神经保护作用，本研究在实验性脑梗死动物模型 上，应用免疫组化染色、western blot技术检测各组大鼠缺血半暗带内XIAP及 AIF的表达情况；应用原位术端标记(TUNEL)法检测脑组织细胞的凋亡情况； 观察黄体酮对脑梗死大鼠缺血半暗带内XIAP、AIF的表达及细胞凋亡的影响； 应用TTC染色观察脑梗死体积的变化；探讨黄体酮对脑梗死大鼠发挥神经保护 作用的可能机制，为脑梗死的临床治疗提供理论依据。 材料与方法 1、试验动物与分组：成年雄性Sprague．Dawley(S．D)大鼠120只，体质 量260～3109，随机分为4组：假手术组(Sham)、模型组(model)、溶剂治疗组(Vehicle) 和黄体酮治疗组(PROG)。每组均设3个时间点：12h、24h、48h(每个时间点9 只大鼠，其中3只用于免疫组化染色，另外6只用于westem blot检测，另外在 各组48h时间点上，取6只大鼠行凋亡染色，6只大鼠行TTC染色)。 2、模型、给药方法、标本制备及指标检测：采用线栓法制备大鼠脑梗死动 物模型，分别于脑梗死12h、24h、48h 3个时问点处死大鼠，取出脑组织，应用 免疫组化染色、westem blot技术检测各组大鼠缺血半暗带内XIAP、AIF的表达 情况；应用TUNEL法检测脑组织细胞的凋亡情况；应用TTC染色检测脑梗死 体积。 3、统计学方法：所有数据均以均数±标准差(x±s)表示，采用SPSSl3．0软 件进行统计，用单因素方差分析进行统计分析，组间比较采用LSD法，以倪=O．05 作为显著性检验标准。 结果 l、黄体酮治疗前后缺血半暗带内XIAP的表达情况XIAP阳性染色主要集 中于细胞核周和胞浆内，显示出粗细不等的棕黄色颗粒，阳性细胞主要位于缺 血半暗带及其较远的缺血较轻区域，假手术组可见极少量的XIAP阳性细胞，模 型组以及溶剂治疗组XIAP表达水平明显升高，随着缺血时间的延长，XIAP表 达水平缓慢下降，在缺血后48h时基本恢复到损伤fi{『水平，黄体酮可明显提高 各个时间点XIAP的表达，与模型组以及溶剂治疗组比较，差异有统计学意义 (户0．05) 摘要2、黄体酮治疗前后缺血半暗带内AIF的表达情况 摘要 2、黄体酮治疗前后缺血半暗带内AIF的表达情况 AIF阳性染色呈棕黄