克雷白氏肺炎杆菌CG43中尿嘧啶双磷酸葡萄糖去氢酶之酪胺酸磷酸.PDF

國立交通大學 國立交通大學 國立交通大學立交通大學 國 分子醫學與分子醫學與生生物物工程研究所工程研究所 分子分子醫學與醫學與 生生物物工程研究所工程研究所 碩士論文碩士論文 碩士論文碩士論文 克雷白氏肺炎桿菌 CG43中尿嘧啶雙磷酸葡萄糖去氫中尿嘧啶雙磷酸葡萄糖去氫 克雷白氏肺炎桿菌 克雷白氏肺炎桿菌雷白氏肺炎桿菌 中尿嘧啶雙磷酸葡萄糖去氫中尿嘧啶雙磷酸葡萄糖去氫 克 酶之酪胺酸酶之酪胺酸磷酸化的磷酸化的角色角色 酶之酶之酪胺酸酪胺酸磷酸化的磷酸化的 角色角色 Role of tyrosine phosphorylation on the UDP-glucose dehydrogenase of Klebsiella pneumoniae CG43 研究生：：葉家華葉家華 (Jia-Hua Yeh) 研究生 研究生究生 ：：葉家華葉家華 研 學號：學號 ：9729503 學號學號 ：： 指導教授：指導教授 ：彭慧玲彭慧玲 博士博士 (Hwei-Ling Peng) 指導教授指導教授 ：：彭慧玲彭慧玲 博士博士 中華民國九十九中華民國九十九年年六月六月 中華民國九十中華民國九十九九 年年六月六月 中文摘要中文摘要 中文摘要中文摘要 克雷白氏肺炎桿菌為一伺機性感染的格蘭氏陰性菌，可藉其外部 包覆的厚重多醣體莢膜躲避細胞的吞噬作用及避免被血清因子所毒 殺。我們先前的研究證實克雷白氏肺炎桿菌蛋白質酪胺酸激酶 (Wzc) 可藉由磷酸化尿嘧啶雙磷酸葡萄糖去氫酶 (UDP-glucose dehydrogenase, Ugd) 來提升Ugd酵素活性，進而調控莢膜多醣體的生 成；而在Ugd 上的 17個酪胺酸殘基，已被選取作定點突變的 9個酪 胺酸殘基的改變並未影響 Ugd的磷酸化。為了確認 Ugd 上被磷酸化 的酪胺酸殘基，本研究將其他 8個酪胺酸殘基，分別在 53 、71 、76 、 85 、203 、252 、302和 380的位置，經點突變技術換成苯丙胺酸。再 將這幾個定點突變後的蛋白質表現純化後，利用西方墨點法發現這些 突變株仍能在大腸桿菌體內被磷酸化，此結果顯示克雷白氏肺炎桿菌 不同於已報導的大腸桿菌與枯草桿菌，可能具有不只一個可受磷酸化 的酪胺酸殘基。同時，酵素活性與動力學特性的分析結果得知， Tyr71 、 Tyr85 、Tyr252和 Tyr380的突變明顯影響了 Ugd酵素活性，而這些點 突變蛋白經由(circular dichroism, CD)圖譜分析，確認其二級結構組成 與野生型 Ugd 無顯著差異，暗示著這些酪胺酸殘基的改變可能因無 法被磷酸化而降低Ugd活性。 i Abstract Klebsiella pneumoniae, an opportunistic gram-negative bacterial phathogen, is mostly encapsulated by a thick capsula