第八章 微生物的遗传变异与育种.pptVIP

质粒的检测 菌体是否含有质粒DNA可通过质粒消除、遗传转移、分子杂交等方法初步检测 质粒消除：理化因子消除法（吖啶橙、利 福平等） 直接证明：从菌体中纯化出质粒DNA 如蛋白酶水解圈 淀粉酶变色圈 抗生素抑菌圈 （1）产量突变株的筛选 国外曾报导了一种筛选春日霉素生产菌时所采用的琼脂块培养法，一年内曾使该抗生素产量提高了10倍。 其要点是将诱变后产生的单菌落在早期用打孔器将其琼脂小块取出，结合抑菌圈的方法，快速鉴定，提高筛选效率。 真核微生物杂交（以霉菌为例） 诱变获具标记的亲本。（关键） 异核体的形成：基本培养基上，强迫进行 　　营养互补。还可用多种方法。 双倍体检出：可从扇面上挑孢子分离。 分离子检出：杂合二倍体单孢子平板分 　　离，检菌落斑点或扇面，斑点处挑孢 　　子至斜面，再纯化鉴别。 2.原生质体融合 （1）基本原理：将两个亲株细胞壁分别通过酶解作用加以剥除，在高渗环境中释放出只有原生质膜包被着的球状原生质体；将两个亲株的原生质体在高渗条件下混合，由聚乙二醇(PEG)等助融，使细胞质融合；通过两套基因组之间的接触、交换，发生基因组的遗传重组，在再生细胞中获得重组体。 （2）育种步骤： ①筛选标记菌株； ②制备原生质体； ③原生质体融合； ④原生质体再生； ⑤选择融合子； ⑥筛选实用性菌株。 一、菌种的衰退与复壮 菌种衰退的原因：大量群体中的自发突变 纯菌种 自发突变 不纯菌种 突变个体 传代增殖 原始个体 衰退菌种 衰退：菌种出现或表现出负变性状 1）从衰退的菌种群体中把少数个体再找出来，重新获得具有原有典型性状的菌种。 a）纯种分离； b）通过寄主体进行复壮； 2）有意识地利用微生物会发生自发突变的特性，在日常的菌种维护工作中不断筛选“正变”个体。 菌种的复壮： 二、防止衰退的措施 1）减少传代次数； 2）创造良好的培养条件； 3）利用单核体传代 4）经常进行纯种分离，并对相应的性状指标进行检查； 5）采用有效的菌种保藏方法； 三、菌种保藏 目的：在一定时间内使菌种不死、不变、不乱，以供研究、生产、交换之用 1、挑选典型菌种的优良纯种 2、尽量使用分生孢子、芽孢等休眠体 3、创造有利于休眠的保藏环境（如干燥、低温） 4、尽可能多的采用不同的手段保藏一些比较重要的微生物菌株 基本原则： 基本方法 培养基传代培养（斜面、平板） 寄主传代培养 低温（液氮、低温冰箱） 干燥（沙土管、真空干燥） 生活态 休眠态 菌种保藏的方法很多，其原理：人为的创造合适的环境条件，使微生物的代谢处于不活跃、生长繁殖受到抑制的休眠状态。即从低温、干燥缺氧三方面设计。 一种好的保藏方法，首先应该能长期保持原种的优良性状不变，同时还需要考虑到方法本身的简便和经济。 复习与思考题 1.名词解释：遗传性与变异性 基因型与表型 饰变 基因突变 营养缺陷型 自发突变 转换 颠换 移码突变 点突突 变突率 野生型 转化 转导 感受态细胞 流产转导 缺陷噬菌体 接合 F因子 菌种复壮 菌种保藏 2.试述证明核酸是遗传物质的3个经典实验，为何均选择了微生物作为研究对象？ 3.试比较普遍性转导和局限性转导的异同。 4.试述基因突变的类型。 5.变量实验与影印试验说明何问题？ 6.互变异构如何引起碱基置换？ 7.试述微生物突变的规律。 8．5-溴尿嘧啶（5-BU）碱基类似物的代谢掺入如何 引起碱基置换？ 9．请你设计筛选营养缺陷型突变体的方案？ 10．试比较大肠杆菌中F因子存在的几种方式及常见的杂交结果。 11．何谓菌种退化？ 12．试述菌种保藏的原理及方法。 ①逐个检出法： 缺陷型的检出： 普遍转导（generalized transduction） 噬菌体可以转导供体菌染色体的任何部分到受体细胞中的转导过程 普遍性转导的三种后果： 外源DNA被降解，转导失败。 进入受体的外源DNA通过与细胞染色体的重组交换 而形成稳定的转导子 流产转导 完全普遍转导 转导DNA不能进行整合、重组和复制，但其携带的基因可经过转录而得到表达。 因此群体中仅一个细胞含有DNA，而其它细胞只能得到其基因产物，在选择培养基平板上形成微小菌落 流产普遍转导 局限转导 温和噬菌体感染 整合到细菌染色体的特定位点上 宿主细胞发生溶源化 溶源菌因诱导而发生裂解时， 在前噬菌体二侧的少数宿主 基因因偶尔发生的不正常切 割而连在噬菌体DNA上 部分缺陷的温和噬菌体 把供体菌的少数特定基因转移到受体菌中 温和噬菌体λ裂解时的不正常切割：包含gal或bio基因 缺陷噬菌体DNA分子在宿主细胞内能够象正常的λDNA分子一样进行复制、包装，提供所需要的裂解功能，形成转导颗粒，但