9R穿膜肽可增强P53抗肿瘤效果.PDFVIP

刘源 等/9R 穿膜肽可增强P53 抗肿瘤效果 955 生 物 工 程 学 报 Chinese Journal of Biotechnology July 25, 2013, 29(7): 955−964 /cjbcn ©2013 Chin J Biotech, All rights reserved 医学与免疫生物技术 9R 穿膜肽可增强P53 抗肿瘤效果 刘源，陈睿，张楠，叶贤龙，白银，魏雨泉，任桂萍，李德山 东北农业大学生命科学学院 生物制药教研室，黑龙江 哈尔滨 150030 刘源, 陈睿, 张楠, 等. 9R 穿膜肽可增强P53 抗肿瘤效果. 生物工程学报, 2013, 29(7): 955−964. Liu Y, Chen R, Zhang N, et al. Anti-tumor efficacy of P53 with 9R cell-penetrating peptides. Chin J Biotech, 2013, 29(7): 955−964. 摘 要: 为解决P53 蛋白难以进入细胞内部发挥治疗作用的瓶颈难题。将p53 基因融合插入带有 9 个精氨酸 作为穿膜肽的表达载体中表达融合蛋白CPPs-P53 ，并与没有穿膜肽的P53 蛋白进行比较，利用Western blotting 方法检测蛋白的表达情况，MTT 及Annexin V/PI 双染法检测细胞生长抑制率及细胞凋亡率。Western blotting 检 测表明已成功在原核表达系统中表达融合蛋白 CPPs-P53 和 P53 蛋白，且蛋白纯度均已达到 90 ％以上；MTT 检测表明，P53 蛋白对肿瘤细胞的生长虽有一定的抑制作用，但融合蛋白 CPPs-P53 与之相比，对肿瘤细胞生 长的抑制效果显著增强，细胞生长抑制率有明显的提升，并且细胞生长抑制率呈现剂量依赖性；Annexin V/PI 双染检测细胞凋亡情况也表明 P53 虽可以在一定程度上诱导肿瘤细胞的凋亡，但与P53 蛋白相比较，融合蛋 白CPPs-P53 诱导的凋亡细胞明显增加，凋亡率是P53 蛋白的2~3 倍。由此说明在抑制肿瘤细胞的生长和诱导 细胞凋亡方面，CPPs-P53 比没有穿膜肽的P53 蛋白的效果更显著。 关键词: P53 ，CPPs-P53 ，穿膜肽，细胞凋亡 Anti-tumor efficacy of P53 with 9R cell-penetrating peptides Yuan Liu, Rui Chen, Nan Zhang, Xianlong Ye, Yin Bai, Yuquan Wei, Guiping Ren, and Deshan Li Biopharmaceutical Teaching and Research Section, College of Life Science, Northeast Agricultural University, Harbin 150030, Heilongjiang, China Abstract: To enhance the penetration of P53 into tumor cells by fusion it with the cell penetrating peptide 9R. The fusion gene of 9R-p53 was cloned into the expression vector. The fusion protein, CPPs-P53, was expressed and purified. We Received: January 11, 2013; Accepted: March 21, 2013 Supported by: Postdoctoral Scientific Re