3-1菊花的组织培养(第二课时).ppt

* * * * * * * * * * * 蛭石是一种天然、无毒的矿物质，在高温作用下会膨胀的矿物。它是一种比较少见的矿物，属于硅酸盐。其晶体结构为单斜晶系，从外形上它看上去像云母。蛭石是一定的花岗岩水合时产生的。它一般与石棉同时产生。由于蛭石有离子交换的能力，它对土壤的营养有极大的作用。 　　蛭石的化学式为（Mg，Ca）0.7（Mg，Fe，Al）6.0[（Al，Si）8.0]（OH4.8H2O）。 * 蛭石是一种天然、无毒的矿物质，在高温作用下会膨胀的矿物。它是一种比较少见的矿物，属于硅酸盐。其晶体结构为单斜晶系，从外形上它看上去像云母。蛭石是一定的花岗岩水合时产生的。它一般与石棉同时产生。由于蛭石有离子交换的能力，它对土壤的营养有极大的作用。 　　蛭石的化学式为（Mg，Ca）0.7（Mg，Fe，Al）6.0[（Al，Si）8.0]（OH4.8H2O）。 * 菊花的组织培养 制备MS固体培养基 外植体消毒 接种 培养 栽培 实验具体操作过程 移栽 实验具体操作过程 （一）制备MS固体培养基 MS培养基包括20多种营养成分，实验室一般使用4。C保存配制好的培养基母液来制备。 1、配置各种母液 ①无机物中大量元素浓缩10倍，微量元素浓缩100倍，常温保存 ②激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可按1mg/ml的质量浓度单独配制成母液 ③用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数，计算用量 实验具体操作过程 2、配置培养基 ①定容 ②调PH ③培养基的分装 实验具体操作过程 实验具体操作过程 3、灭菌 分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸汽灭菌。 注意： ①温度为121℃时，维持15-20分钟。若灭菌时间过长，会使培养基中的某些成分变性失效。 ②某些生长调节剂如赤霉素等以及某些维生素遇热是不稳定的，不能同培养基一起高压灭菌，而需要进行过滤灭菌。 实验具体操作过程 1、选材：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝 （二）外植体消毒 考虑的因素 ?? 说?? 明 外植体的年龄 选择幼嫩的组织或器官作为外植体 外植体的大小 选择大小适中的作为外植体 外植体所在部位 选择芽尖、根尖或幼嫩的茎作为外植体 外植体外观形态 选择表面相对光滑易消毒的作为外植体 2、表面消毒 ①流水冲洗 菊花茎段用流水冲洗后可加少许洗衣粉，用软刷轻轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗20min左右 ② 酒精处理—无菌水冲洗 用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体积分数为70％的酒精中摇动2－3次，持续6－7s，立即将外植体取出，在无菌水中清洗 ③氯化汞（升汞）—无菌水冲洗 取出后用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入质量分数为0.1％的氯化汞溶液中1－2min，取出后在无菌水中至少清洗3次，漂净消毒液 实验具体操作过程 流水冲洗 实验具体操作过程 实验具体操作过程 （三）接种 1、接种室消毒 污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种室消毒是至关重要的。用70％的酒精喷雾使空气消毒，酒精擦洗工作台并用紫外线照射20分钟。 2、无菌操作要求 操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后，都需要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。 实验具体操作过程 插入时应注意方向，不要倒插，茎段、茎尖基部插入培养基利于吸收水分和养分。 3、材料的切取和接种 实验具体操作过程 进行外植体的接种 接种前用体积分数为70%的酒精将工作台擦拭一遍，打开紫外灯照射20分钟。工作台消毒后，首先点燃酒精灯。 酒精摇动 倾倒酒精 无菌水冲洗 升汞消毒 倾倒升汞 无菌水冲洗 特别提醒：接种过程必须始终在酒精灯旁进行，每次使用器械后，都需要用火焰灼烧灭菌，操作过程中避免双手从培养皿上方移动。 特别提醒：每瓶内接种材料不宜过多（建议4-5个），彼此之间留出一定空间，从而避免互相污染。 思考：你打算做几组重复？你打算设置对照实验吗？ 每种材料或配方至少要做一组以上的重复。设置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培养基的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养，用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染。 实验具体操作过程 实验具体操作过程 （四）培养 无菌箱中培养，定期消毒，保持适宜的温度，光照 接种后的锥形瓶放在培 养箱或培养室中培养。 培养条件：18-22℃， 每日光照12小时。 实验结果 5-7天，外植体膨胀、生长，颜色变浅，若出现染菌，及时转瓶。 实验结果 2-3周，愈伤组织开始形成。 染菌5-7天后 染菌1-2周后 实验结果 3-5周之后，诱导出的新叶片和芽。 实验具体操作过程 （五）移栽 移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养瓶的封口膜，让试管苗在培养间生长几日 1、打开封口膜 2、清洗转移 用流水清洗根部的培