干细胞诱导、细胞系诱导和原代分离3种提取成骨细胞的方法比较.docVIP

www.CRTER www.CRTER.org 邓享誉，等. 干细胞诱导、细胞系诱导和原代分离3种提取成骨细胞的方法比较 www.CRTER www.CRTER.org 邓享誉，等. 干细胞诱导、细胞系诱导和原代分离3种提取成骨细胞的方法比较 PAGE 2734 P.O. Box 10002 PAGE 3 P.O.Box 1200, www.CRTER.org中国组织工程研究 第21卷 第17期 2017–06– www.CRTER.org Chinese Journal of Tissue Engineering Research June 18, 2017 Vol.21, No.17 · ·研究原著· PAGE 2729 ISSN 2095-4344 CN 21-1581/R CODEN: ZLKHAH 干细胞诱导、细胞系诱导和原代分离3种提取成骨细胞的方法比较 邓享誉，陈 胜，邵增务，郑 东(华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科，湖北省武汉市 430000) 引用本文：邓享誉，陈胜，邵增务，郑东. 干细胞诱导、细胞系诱导和原代分离3种提取成骨细胞的方法比较[J].中国组织工程研究，2017，21(17):2729-2734. DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2017.17.017 ORCID: 0000-0003-3250-2833(郑东) 文章快速阅读： 三种方法获得成骨细胞的钙化能力 三种方法获得成骨细胞的钙化能力 结论：(1)骨髓间充质干细胞分离培养具有更多不可控因素；(2)MC3T3细胞用含有地塞米松的诱导培养液2进行成骨诱导方法较好。 结论： (1)骨髓间充质干细胞分离培养具有更多不可控因素； (2)MC3T3细胞用含有地塞米松的诱导培养液2进行成骨诱导方法较好。 结果： (1)3种培养或诱导方法均可得到具有成骨特性的成骨细胞； (2)除MC3T3诱导液1诱导成骨细胞与原代成骨细胞之间无显著差异外，其余两两相比成骨能力有显著差异。 方法： 对3种方法获得的成骨细胞进行茜素红钙结节染色，观察成骨特性。 材料： (1)第3代小鼠骨髓间充质干细胞用成骨诱导培养基诱导21 d； (2)前成骨细胞系MC3T3-E1分别用成骨诱导培养液1和成骨诱导培养液2诱导21d； (3)原代小鼠颅骨成骨细胞。 文题释义： 细胞系：指原代细胞培养物经首次传代成功后所繁殖的细胞群体。也指可长期连续传代的培养细胞。由此便引申出了后来的有限细胞系、无限细胞系，因此，细胞系狭义是指可连续传代的细胞，广义是指可传代的细胞。 诱导分化：细胞分化是指同一来源的细胞逐渐产生出形态结构、功能特征各不相同的细胞类群的过程。细胞分化的本质是基因组在时间和空间上的选择性表达，通过不同基因表达的开启或关闭，最终产生标志性蛋白质。诱导分化即人为干预或外在因素作用下，使得细胞向特定方向成熟的过程。 摘要 背景：成骨细胞是骨组织构建的重要组织细胞之一。成骨细胞取材困难，不同方法获得的成骨细胞纯度及钙化能力不尽相同。 目的：比较小鼠骨髓间充质干细胞成骨诱导、细胞系MC3T3-E1成骨诱导和小鼠颅骨原代细胞培养3种方法获得的成骨细胞的纯度及钙化能力。 方法：采用贴壁纯化法分离出小鼠骨髓间充质干细胞，传至3代后用成骨诱导培养基诱导21 d；将前成骨细胞系MC3T3分别用成骨诱导培养液1和成骨诱导培养液2诱导21 d；使用Ⅰ型胶原酶消化法取得乳鼠颅骨原代成骨细胞。对3种方法获得的成骨细胞进行茜素红钙结节染色，观察其成骨特性。 结果与结论：①骨髓间充质干细胞诱导后钙结节平均为16.3个/低倍镜视野；②前成骨细胞系MC3T3诱导培养液1组可观察到稀疏的钙结节，平均为1.7个/低倍镜视野，诱导培养液2组可观察到密集的钙结节，平均为44.6个/低倍镜视野，两种诱导液相比钙结节形成能力差异有显著性意义(P 0.01)；③原代成骨细胞钙结节平均为0.6个/低倍镜视野；④除MC3T3诱导液1组与原代成骨细胞相比差异无显著性意义外，其余两两相比成骨能力差异均有显著性意义(P 0.01)；⑤由于骨髓间充质干细胞分离培养具有更多不可控因素，因此MC3T3细胞用含有地塞米松的诱导培养液2进行成骨诱导方法较好。 关键词： 干细胞；分化；骨髓间充质干细胞；MC3T3；成骨细胞；成骨诱导；钙结节染色；吉姆萨染色；国家自然科学基金 主题词： 骨髓；间质