免疫缺陷动物转基因动物.ppt

转基因动物 转基因动物是指染色体基因组中整合有人工导入的外源基因或特定DNA片段并能将其遗传给后代的一类动物。 由于转基因(transgene)既可整合到动物所有组织细胞(体细胞和生殖细胞)的基因组中，也可只整合到部分组织细胞的基因组，后者即称嵌合体动物，应用转基因动物作为人类疾病动物模型已成为当前的主流。经鉴定可作为人类疾病动物模型的转基因动物有数百种。 2、LP-BM5MuLV诱发的小鼠AIDS（MAIDS）模型 LP-BM5MuLV的小鼠白血病病毒混合物，实验感染小鼠后，可导致小鼠AIDS（MAIDS） 3、转基因小鼠形成的AIDS模型 4、移植HIV感染的肿瘤细胞株形成的裸鼠AIDS模型 （二）猫AIDS（FAIDS）模型 猫白血病病毒（FeLV）是一种水平传播的C型逆转录病毒，感染猫产生白血病或免疫缺陷疾病，后一类疾病表现为胸腺萎缩、中性粒细胞减少、贫血、T细胞数量及功能下降、NK细胞功能抑制（但B细胞功相对完整）、致死性机会感染、淋巴瘤形成，因而近来已被称之为猫AIDS（FAIDS）。 （三）猴AIDS模型 1、D型逆转录病毒诱导的猴AIDS（SAIDS）模型 2、猴免疫缺陷病毒SIV诱导的猴AIDS（SAIDS）模型 （四）黑猩猩的HIV感染模型 HIV接种啮齿类、家兔及猕猴等多种动物的尝试都未获成功。能感染HIV的动物只有价格昂贵的黑猩猩，而黑猩猩不出现任何临床症状。因此，目前尚缺乏理想的AIDS动物模型。但对与HIV相关的动物病毒以及与AIDS相似的动物疾病的研究，尤其是携带有人类免疫成分的SCID小鼠以及转基因小鼠AIDS模型的建立将有助于弄清AIDS的发病机理、研制疫苗和建立有效的防治方法。 * * 免疫缺陷动物（Immunodficient animal）是指由于先天性遗传突变或用人工方法造成一种或多种免疫系统组成成分缺陷的动物。 免疫缺陷动物 一、T淋巴细胞功能缺陷动物 （一）裸小鼠(Nude mouse) 1962年Grist在非近交系小鼠中偶然发现有个别无毛小鼠，后来证实是由于基因突变造成的，并伴有先天性胸腺发育不良，称为裸小鼠(nude mice)，用“nu”表示裸基因符号。 1966年Flanagan证实这种无毛小鼠是由于第11号染色体等位基因突变引起的。 1968年Pantelouris发现裸小鼠失去了正常胸腺结构，淋巴结胸腺依赖区的淋巴细胞消失，外周血中淋巴细胞数目减少。 1969年丹麦Rygaard首先将人结肠腺癌移植裸小鼠获得成功。这些发现引起了医学和生物学工作者极大的兴趣，为免疫缺陷动物的研究和应用开辟了新局面。 裸小鼠的主要特征是无毛（hairless）、裸体（nude）和无胸腺（athymus），并随年龄增加皮肤变薄，头颈部皮肤皱褶。发育迟缓。由于裸小鼠无胸腺，仅有胸腺残迹或异常的上皮细胞，且这种上皮不能使T细胞正常分化，缺乏成熟T细胞的辅助、抑制及杀伤功能，因而细胞免疫力低下，不能执行正常成熟T细胞的免疫功能。裸小鼠B淋巴细胞正常，但功能有欠缺，免疫球蛋白主要是IgM，只有少量IgG。成年裸小鼠（6-8周龄）较普通小鼠有较高水平的NK细胞活性，但幼鼠（3-4周龄）的NK细胞活性低下。裸小鼠粒细胞也比普通小鼠数量少。 饲养和繁殖条件要求比较严格。一般所用的笼具、垫料、饲料、饮水等都得经过灭菌消毒并采用隔离器或在SPF环境下饲养。在生产上一般用纯合型雄鼠与杂合型雌鼠交配（♂nu/nu×♀nu/+）可获1/2纯合型仔代。 国内常用品系为BALB/C-nu/nu，C57BL/6J-nu/nu，C3H/He-nu/nu和AKR-nu/nu。 不同近交系裸小鼠因其遗传背景不同，所表现的细胞免疫反应和实验检查指标也不尽相同，具有不同的生物学特征，在研究中要注意选用。 另外，随着裸小鼠年龄增长或其它因素（如病毒感染）的影响，裸鼠体内的正常T细胞有可能增加，故接种肿瘤实验一般采用4-8周龄裸小鼠。 裸小鼠在生物医学研究中的应用 人类肿瘤移植研究 在肿瘤药物治疗和肿瘤免疫研究方面 免疫和遗传研究 微生物研究 内分泌和老年学上的应用 生物制品和药品的检定 在临床医学方面 人类肿瘤移植于动物的历史 免疫排斥问题 眼前房，脑内，地鼠的颊囊等免疫逃避部位 免疫抑制剂、射线照射的使用 裸鼠作为人类肿瘤受体 实验中常用腹水瘤和实体瘤两种方式进行移植。 1.对于会产生腹水的肿瘤，可将其一定数量的细胞注入受体动物腹腔形成腹水瘤或产生腹水。 2. 实体瘤移植： 1)小块接种法: 在无菌条件下，把实体瘤切成2～3mm小块，植