抗TNF-α抗ED-B双特异抗体在酵母中分泌表达和活性分析.PDF

722 生 物 工 程 学 报 胡雪平 等/抗TNF-α/抗ED-B 双特异抗体在酵母中的分泌表达与活性分析 Chinese Journal of Biotechnology /cjbcn May 25, 2015, 31(5): 722−733 DOI: 10.13345/j.cjb.140350 ©2015 Chin J Biotech, All rights reserved 医学与免疫生物技术 抗TNF-α/抗ED-B 双特异抗体在酵母中的分泌表达与 活性分析 1,2 1,2 1,2 1,2 1,2 胡雪平 ，谢冕 ，李路军 ，蒋思婧 ，刘梦元 1 湖北大学生命科学学院 感染与免疫研究中心，湖北 武汉 430062 2 湖北绿色生物资源转换协同创新中心，湖北 武汉 430062 胡雪平, 谢冕, 李路军, 等. 抗TNF-α/抗ED-B 双特异抗体在酵母中的分泌表达与活性分析. 生物工程学报, 2015, 31(5): 722–733. Hu XP, Xie M, Li LJ, et al. Expression and characterization of a bispecific antibody targeting TNF-α and ED-B containing fibronectin. Chin J Biotech, 2015, 31(5): 722–733. 摘 要: 赋予抗 TNF-α 单链抗体片段 (TNF-scFv) 对炎症组织的特异性，用一段来自人清蛋白 (HSA) 的柔 性连接肽在基因水平上连接TNF-scFv 和抗B 型纤维连接蛋白 (B-FN) 的额外域B (ED-B) 的scFv L19 ，构建 了抗TNF-α/抗ED-B 单链双特异抗体BsDb ，其中B-FN 为炎症组织中特异表达的抗原。BsDb 在毕赤酵母中获 得了分泌表达，表达产物经鉴定和纯化制备后，进行了功能分析。结果表明，BsDb 保留了其亲本抗体TNF-scFv 和L19 对抗原的免疫反应性，能够同时结合TNF-α和ED-B ，并中和TNF-α 的生理作用。而且，BsDb 对抗原 的亲和力及中和能力与大肠杆菌包涵体来源的亲本抗体相比显著增强。在小鼠佐剂型关节炎 (AIA) 模型中， BsDb 能选择性地积累和保留于小鼠的炎症关节，并快速从血浆中清除。说明BsDb 兼备炎症组织的特异性和 正常组织的低毒性，在类风湿关节炎及其他慢性炎症性疾病的治疗上具有较大潜力。 关键词: 双特异抗体，肿瘤坏死因子 α，纤维连接蛋白，额外域B ，类风湿关节炎 Received: July 1, 2014; Accepted: October 29, 2014 Supported by: National Natural Science Foundation of China (No.H3004). Corresponding author: Mengyuan Liu. Tel: +86-27 Fax: +86-27 E-mail: liumengy@ 国家自然科学基金 (No.H3004) 资助。 网络出版时间：2014-11-17 网络出版地址：/kcms/doi/10.13345/j.cjb.140350.html 胡雪平