Western-blot检测服务提交单课件.docVIP

PAGE 1 PAGE 1 精品文档 Western blot检测服务提交单 汉恒生物：顶级慢病毒/腺病毒包装服务供应商，独家推出国内最大预装基因病毒现货库 姓名： 科室负责人： 单位:（精确到研究组） 固定电话: 移动电话： 地址： E-mail： 送样日期： （复选框请双击选择） （以下由客户填写） 样品要求 　客户需提供新鲜或正确保存的蛋白样品或者蛋白提取液，阳性对照样品（细胞或组织）， 检测目的蛋白的一抗（或由汉恒生物代购）。样品要求为： 1、细胞不少于5×106个；2、组织样品不少于50mg；3、总蛋白浓度不低于 2μg/μl（至少50μl）。 样品类型（或蛋白来源） FORMCHECKBOX细胞（或裂解液），细胞名： FORMCHECKBOX组织（或裂解液）：组织名： FORMCHECKBOX其他： 样品有无致病性 FORMCHECKBOX无 FORMCHECKBOX有 样本信息 样品编号 中/英文名称 浓度或体积等 检测指标（多个指标格式A/B/C） 内参蛋白 一抗（是否提供，请列出） （如有多个样品请添加） 实验内容 1、蛋白提取和定量（如果提供蛋白样品，则直接电泳预实验检测抗体特异性）；2、SDS15% 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳；3、转膜（PVDF膜）；4、封闭（5%脱脂奶粉）；5、一抗孵育（其中内参基因为Tubulin、GAPDH或Actin）；6、二抗孵育（如果由于材料降解或一抗造成实验无法继续，则收相关预实验费用）；7、显色（ECL）；8、曝光、洗片、分析。 最后提供 蛋白浓度，扫描图，以及灰度分析（如果需要）及完整实验报告。 注意事项 每张膜上做一种目的蛋白和相应的内参蛋白。每张膜上可以做8个样品。一般状况下，2周即可完成实验。如遇特殊情况，如一抗不好，蛋白浓度低或蛋白特殊，如分子量大等，周期会有所延长。 其他特殊 说明 备注 1、表格填写完毕请回发至原邮箱或发送至： HYPERLINK mailto:service@hanbio.net service@hanbio.net。 （以下由汉恒生物人员填写） 市场部负责人 实验项目简略信息 其他补充说明 附录： Western Blot细胞蛋白样本的准备及运输： 去掉培养液，用PBS洗一次后，加入少量PBS，用细胞刮将细胞刮下，用1ml枪吸取细胞易于1.5ml EP管中，快速离心（升至最高转速就可stop）去除上清后，可按下面两种方法运输： 1、细胞干运输： 将细胞干放入液氮速冻，-80℃保存; 如需长途过夜运输，建议干冰运输；如当天送达样本，可用液氮或者-80冰袋运输。 2、细胞裂解液运输： 加入一定量的胞裂解液后即可冷藏运输（冰袋或者冰盒）。如需检测磷酸化蛋白，建议裂解液中加入终浓度1mM的NaF，NaF可抑制磷酸酶活性，保护蛋白磷酸化水平。如果加入裂解液后提取蛋白，则置于冰上裂解1 h，12000rpm离心10 min后取上清，即为蛋白样本。蛋白样本可-20度冷藏运输（建议快递寄送用干冰或者足量-80度冰袋），保存需要-80℃。 3、蛋白样本运输 注意：蛋白样本需要经过浓度测定，再进行变性，变性时先加入Sample buffer，再95℃ 10 min，Sample buffer可防止变性导致的蛋白沉淀析出。变性的蛋白可直接冷藏运输，-20℃稳定保存。