第7章吸光光度法621.pptVIP

稀释一倍后， 在一个显色体系内，若符合L-B定律，ε应当相等，而本例中ε1和 ε2不相等，故不符合L-B定律 本章小结 吸光光度法基本原理 光度计的基本部件 显色反应及显色条件的选择 吸光度测量条件的选择 吸光光度法的应用示例 返回 物质的颜色是由于物质对不同波长的光选择性吸收而产生的。 多组分体系中，如果各种吸光物质之间没有相互作用，当某一波长的单色光通过此溶液时，溶液的总吸光度等于各组分吸光度之和。 利用加和性可进行多组分测定及某些化学反应平衡常数的测定。 　　有时标准曲线不通过原点。可能是由于参比溶液选择不当，吸收池厚度不等，吸收池位置不妥，吸收池透光面不清洁等原因所引起的。若有色络合物的解离度较大，特别是当溶液中还有其他络合剂时，常便被测物质在低浓度时显色不完全。　　找出原因，加以避免。 使用比较好的单色器，从而获得纯度较高的 “单色光”，使标准曲线有较宽的线性范围。人射光波长选择在被测物质的最大吸收处，保证测定有较高的灵敏度，此处的吸收曲线较为平坦，在此最大吸收波长附近各波长的光的ε值大体相等，由于非单色光引起的偏离要比在其他波长处小得多。测定时应选择适当的浓度范围，使吸光度读数在标准曲线的线性范围内。 解离 大部分有机酸碱的酸式、碱式对光有不同的吸收性质，溶液的酸度不同，酸(碱)解离程度不同，导致酸式与碱式的比例改变，使溶液的吸光度发生改变。 络合 显色剂与金属离子生成的是多级络合物，且各级络合物对光的吸收性质不同，例如在Fe(Ⅲ)与SCN-的络合物中，Fe(SCN)3颜色最深，Fe(SCN)2+颜色最浅，故SCN-浓度越大，溶液颜色越深，即吸光度越大。 缔合 例如在酸性条件下，CrO42-会缔合生成Cr2O72-，而它们对光的吸收有很大的不同。 朗伯－比耳定律要求吸光物质的溶液是均匀的。如果被测溶液不均匀，是胶体溶液、乳浊液或悬浮液时，入射光通过溶液后，除一部分被试液吸收外，还有一部分因散射现象而损失，使透射比减少，因而实测吸光度增加，便标准曲线偏离直线向吸光度轴弯曲。故在光度法中应避免溶液产生胶体或混浊。 玻璃棱镜适用于350－3200nm波长范围，它吸收紫外光因而不能用于紫外光度分析；石英棱镜适用于185－4000 nm波长范围，可用于紫外－可见光度分析。 常见的分光光度计 紫外分光光度计 §7-5 显色反应及显色条件的选择 一、显色反应的要求 二、显色反应的选择 三、显色条件的选择 四、显色剂 返回 一、显色反应（ Color reaction ）的要求 显色反应：待测物质本身有较深的颜色，直接测定；待测物质是无色或很浅的颜色，需要选适当的试剂与被测离子反应生成有色化合物再进行测定，此反应称为显色反应，所用的试剂称为显色剂（color reagent）。 按显色反应的类型来分，主要有氧化还原反应和配位反应两大类，而配位反应是最主要的。 返回 显色反应的要求 灵敏度高，有色物质的ε应大于104； 选择性好，干扰少，或干扰容易消除； 有色化合物的组成恒定，化学性质稳定，至少保证在测量过程中溶液的吸光度基本恒定； 显色剂在测定波长处无明显吸收，即显色剂对光的吸收与配合物的吸收有明显区别，要求两者的最大吸收峰波长之差Δλ（称为对比度）大于 60 nm。 返回 二、显色条件的选择 显色剂用量 酸度 显色温度 显色时间 干扰的消除 溶剂 返回 1. 显色剂的用量 M + R = MR （被测组分） （显色剂） （有色配合物） 为使显色反应进行完全，需加入过量的显色剂。但有些显色反应，显色剂加入太多，反而会引起副反应，对测定不利。如： Mo(SCN)32+ Mo(SCN)5 Mo(SCN)6- 在实际工作中根据实验结果来确定显色剂的用量。 返回 ← → SCN-浓度过低 SCN-浓度过高 红色 浅红色 浅红色 c A 0 c A 0 c A 0 1 2 3 返回 C 为显色剂的浓度 Ca Ca Cb Cb 2. 酸 度 R + H+ → HR 影响显色剂的平衡浓度（影响显色反应）和颜色 影响被测金属离子的存在状态(酸度低时易水解） 影响配合物的组成 , 如：Fe3++ssal 制作pH与吸光度关系 曲线确定pH范围。 pH A 0 返回 pH=2~3 , Fe(ssal)红紫色 pH=4~7, Fe(ssal)2棕橙色 pH=8~10, Fe(ssal)3黄色 3. 显色温度 显色反应大多在室温下进行，有