课件：补充蛋白质理化性质.ppt

1. ?为何蛋白质的含氮量能表示蛋白质的相对量？如何根据蛋白质的含氮量计算蛋白质的含量？ 各种蛋白质的含氮量颇为接近，平均为16% ，因此测定蛋白质的含氮量就可推算出蛋白质的含量。常用的公式为 100克样品中蛋白质含量（克%）═ 每克样品中含氮克数× 6.25×100 。 2 称取25mg蛋白酶配成25mL溶液，取2mL溶液测得含蛋白氮0.2mg，另取0.1mL溶液测酶活力，结果每小时可以水解酪蛋白产生1500μg酪氨酸，假定1个酶活力单位定义为每分钟产生1μg酪氨酸的酶量，请计算： （1）酶溶液的蛋白浓度及比活。（2）每克纯酶制剂的总蛋白含量及总活力。 ?举例说明蛋白质一级结构、空间结构与功能之间的关系。 蛋白质一级结构是高级结构的基础。 1、 2、 3、有相似一级结构的蛋白质，其空间构象和功能也有相似之处。如镰刀形红细胞性贫血是因其Hb的β-链上一个氨基酸发生改变所致（由正常的β-6-Glu变为β-6-Val）。 蛋白质的空间结构与功能密切相关，如Hb由T型（紧密型）变为R型（疏松型），Hb与氧的亲和力增大约200倍。 。。 THANK YOU SUCCESS * * 可编辑 （3）和（4）目的是除去蛋白质，而不是分离提纯蛋白质。 * * * 甲叉双丙烯酰胺，中间有横桥 * * 純化酵素是一件非常基本的工作，很多重要的研究，都脫不開酵素的純化工作。而大多數酵素的純化，基本上也脫不開一些最基本的原則。 首先，建立一個完善的酵素實驗室是很必要的；我們把許多實驗室內的運作細節一一交代，期望同學能認知這些經驗，確實接收並養成習慣，且期望應用到將來每個人的研究工作上。 最先遇到，但是最容易被忽視的步驟，就是材料處理及總蛋白質的抽取。將提醒你小心選擇採料的種類、時期、部位等，並選擇一個良好的粗抽取方式，以便有一個良好的開始。 网络状不同于球状载体填料 * * * * 純化酵素是一件非常基本的工作，很多重要的研究，都脫不開酵素的純化工作。而大多數酵素的純化，基本上也脫不開一些最基本的原則。 首先，建立一個完善的酵素實驗室是很必要的；我們把許多實驗室內的運作細節一一交代，期望同學能認知這些經驗，確實接收並養成習慣，且期望應用到將來每個人的研究工作上。 最先遇到，但是最容易被忽視的步驟，就是材料處理及總蛋白質的抽取。將提醒你小心選擇採料的種類、時期、部位等，並選擇一個良好的粗抽取方式，以便有一個良好的開始。 * * 純化酵素是一件非常基本的工作，很多重要的研究，都脫不開酵素的純化工作。而大多數酵素的純化，基本上也脫不開一些最基本的原則。 首先，建立一個完善的酵素實驗室是很必要的；我們把許多實驗室內的運作細節一一交代，期望同學能認知這些經驗，確實接收並養成習慣，且期望應用到將來每個人的研究工作上。 最先遇到，但是最容易被忽視的步驟，就是材料處理及總蛋白質的抽取。將提醒你小心選擇採料的種類、時期、部位等，並選擇一個良好的粗抽取方式，以便有一個良好的開始。 * 高效的分辨率 浓缩效应 电荷效应 分子筛效应 PAGE的三种分离效应 （2）等电点聚焦 蛋白质是两性电解质 当pH=pI时净电荷为零，在电场中既不向正极也不向负极移动，此时的pH就是该蛋白质的等电点(pI) 以PAG为电泳支持物，并在其中加入两性电解质载体，在电场作用下，两性电解质载体在凝胶中移动，形成pH梯度，蛋白质在凝胶中迁移至其pI的pH处，即不再泳动而聚焦成带，这种方法称聚丙烯酰胺等电聚焦电泳(isoelectric focusing，IEF) 原理: ■ 等电聚焦的运作机制： - + pH 3 5 7 9 11 + + + + + + - - - - - - - + - - + + + - - - + + + + - - + + + - - - - + Adapted from Alberts et al (2002) Molecular Biology of the Cell (4e) p.487 + + - - （3）双向凝胶电泳 2.离子交换层析法 不同载体： 离子交换纤维素 离子交换交联葡聚糖：兼有分子筛效应 离子交换交联琼脂糖 亲和层析法(AC) （七）利用对配体的特异生物学亲和力 的纯化方法 Pr 琼脂糖小珠 配体： 凝集素， 抗原，抗体 金属螯合剂 杂质 杂质 蛋白质 ＋ 配体 蛋白质配体复合物 配体的选择 可选择配体的种类： 抑制剂 效应物 酶的辅助因子 类似底物