输血相容性检测.pptx

输血相容性检测四三二一五内 容 提 要红细胞抗原抗体检测技术抗体的筛选及鉴定交叉配血抗筛和配血结果分析案例分析红细胞抗原抗体检测技术盐水介质凝集试验抗人球蛋白试验酶介质凝集试验凝聚胺试验微柱凝胶免疫试验盐水介质凝集试验盐水介质中红细胞上的抗原决定簇与相应抗体分子上的抗原结合位点结合，交叉联结形成肉眼可见的凝集。用于IgM抗体的检出、鉴定、盐水配血试验以及血型的鉴定。当特异性的IgG类抗A、抗B的浓度足够大时，在盐水介质里也能与相应的红细胞发生凝集反应，与红细胞表面抗原位点数目和抗原决定簇位置有关。盐水介质凝集试验方法：玻片法-便于显微镜观察结果 试管法-适用于不同温度、便于洗涤反应温度：4～22℃临床意义：盐水凝集试验阳性，并在37℃也有活性的抗体有意义。室温有活性，37℃无活性者临床意义不大。优点：简便、快捷、直观。 缺点：不能发现不完全抗体。抗人球蛋白试验抗人球蛋白试验是1945年由Coombs等人建立的，又称Coombs试验。抗人球蛋白试验的建立在血型血清学上有着非常重要的意义。分为直接抗人球蛋白试验（DAT）和间接抗人球蛋白试验（IAT）。抗人球蛋白试验原理IgG类血型抗体（主要是免疫抗体，如Rh血型抗体）分子量小，与红细胞相应抗原结合后，在盐水介质中不出现肉眼可见的凝集反应，称之为不完全抗体，但在加入抗-IgG后，以其搭桥作用则可出现凝集反应。补体成分在体内被红细胞抗原抗体复合物激活以后，结合在红细胞表面。在体外含补体的多克隆抗体，或抗C3b、抗C3d等单特异性抗体与补体致敏的红细胞反应，使之凝集也称为抗球蛋白试验。直接抗人球蛋白试验DAT是检测体内致敏红细胞的一种方法，用于检查红细胞是否已被不完全抗体所致敏，尤其是IgG和C3d包被的红细胞。应用：HDN和自身免疫性溶血性贫血的诊断红细胞被药物抗体致敏的检查急性和迟发性溶血性输血反应的检查间接抗人球蛋白试验IAT是检测血清中不完全抗体的一种，用于测定在体外能引起红细胞致敏的抗体。应用：血型的鉴定，如Rh血型抗体的检出和鉴定交叉配血酶介质凝集试验原理：红细胞表面有丰富的唾液酸，带有负电荷，是红细胞相互排斥的原理。蛋白水解酶能消化破坏这种唾液酸，减少红细胞表面的负电荷以及红细胞之间的排斥力，缩短了红细胞之间的间距，使IgG抗体分子能与有相应抗原的红细胞产生凝集常用的酶（0.5%）：菠萝酶、木瓜酶、胰酶、无花果酶酶介质凝集试验优点： 酶法能显著增强一些抗原抗体系统的反应活性，Rh和Kidd系统最明显缺点： ①酶法处理RBC，蛋白酶会使RBC的抗原结构破坏和变性（M、N、Fya、Fyb） ②操作繁复，少数人对酶液过敏凝聚胺试验原理： 凝聚胺是一种多价阳离子聚合物，在溶液中有多个阳离子基团，能中和红细胞表面的负电荷，并借助正负电荷的作用，引起红细胞的非特异性凝集。 当红细胞与血清在低离子介质中孵育后，IgG抗体与红细胞上相应的抗原结合在凝聚胺的作用下发生凝聚。凝集和凝聚在表面上不能区分，再加入枸橼酸钠重悬液，枸橼酸根的负电荷与凝聚胺上的正电荷中和，非特异性凝集现象消失，而真正的凝集不会消失。微柱凝胶试验原理：微柱凝胶技术是用特定的化学物质做成微型凝胶柱，柱的上端有一个加样反应室。抗原抗体反应后离心，凝胶柱起过筛作用，红细胞凝集块不能通过凝胶的间隙而留在凝胶的上部，未凝集的红细胞通过凝胶的间隙，沉积到底部。微柱凝胶免疫反应的本质：凝集反应红细胞抗原与相应抗体反应出现凝集。根据红细胞在胶质介质中的位置肉眼判断。微柱凝胶试验特异性胶：抗A、抗B、抗D中性胶：对照孔、反定型抗人球蛋白胶：抗筛、交叉配血几种方法的比较方法优点缺点盐水法操作方便,费用低廉只能检出不相配合完全抗体,不能检出不相配合的不完全抗体抗球蛋白法检测不完全抗体最灵敏的方法 操作复杂、不利于急诊检查和血库的大批量工作酶法增强Rh 、Kidd系统破坏M、N、S、s、Fy(a) 、Fy(b)抗原结构,易失活,寿命短,反应时间长凝聚胺法方便、应用最广Kell系统部分抗体如抗K 、抗 kp(a) 、抗kp(b)检测不出,需要抗球蛋白试验.且肝素对其有影响,易引起假阴性.微柱凝胶法国际安全输血检查的推荐方法，灵敏度高、重复性好、特异性好、检测结果可较长时间保存费用高抗体的筛选及鉴定有临床意义的抗体：能引起新生儿溶血病、引发溶血性输血反应，或者使输入的红细胞存活期减少的在37℃有反应的同种异型抗体不规则抗体：抗A，抗B以外的抗体包括：同种抗体和自身抗体抗体筛选方法盐水介质凝集法抗人球蛋白法凝聚胺法微柱凝胶法结果的判读与解释溶血和血液凝集意义相同，都是抗原抗体反应阳性结果。先观察有无溶血，后观察有无凝集。记录结果，并与以前结果对照。抗体筛选试验不一定能检出所有有临床意义的抗体。一些低频抗原的抗体或有剂量效应的抗体，可能被漏检