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肿瘤药理实验方法 细胞株与细胞系的概念 初代培养物开始第一次传代培养后的细胞，即称之为细胞系（Cell Line）。 从一个经过生物学鉴定的细胞系用单细胞分离培养或通过筛选的方法，由单细胞增殖形成的细胞群，称细胞株（Cell strain）。 肿瘤药理学基本的实验方法●肿瘤细胞体外实验方法 （动物的，人的）●动物肿瘤体内实验方法 （移植性、诱发性、自发性） ●肿瘤转移的动物实验模型 ●肿瘤免疫药理研究方法肿瘤药理学实验方法体内实验 In vivo (In Vitro) 肿瘤药理学体内实验方法 整体动物实验法是评价一个药物是否有效的最主要的方法，即使在体外有一个很好的疗效，最终也一定要在体内进行观察。因此，用整体动物实验方法来观察药物的作用显得很重要。 研究药物的体内抗肿瘤作用，就必须建立各种肿瘤的动物模型，模型越接近于人体其意义越大。动物肿瘤体内实验方法●实 验 动 物 的 选 择●移植性动物肿瘤模型●诱发性动物肿瘤模型●自发性动物肿瘤模型 动物肿瘤体内实验方法动 物 的 选 择 不同种类的动物对致癌物质的敏感性不同，其癌自发率也不同。常用于自发、诱发或移植的动物有： 小鼠、裸 鼠、金黄地鼠、大鼠 豚鼠、两栖类动物如蛙、鸟类。 其它许多家畜如猪马牛羊犬猫家兔等都可发生各种肿瘤。动物肿瘤体内实验方法动物的选择小 鼠 小鼠肿瘤自发率高，其自发性肿瘤无论是从组织发生、临床过程以及组织形态学上都与人类的肿瘤接近。所以小鼠目前广泛用于癌、肉瘤、白血病以及其它恶性肿瘤的研究。进行抗肿瘤药物筛选，小鼠自发性肿瘤模型优于移植性肿瘤模型。动物肿瘤体内实验方法动物的选择裸 鼠 裸鼠是一种独特的纯系动物，全身无毛，先天性无胸腺，T淋巴细胞缺乏，细胞免疫功能缺乏，对异体移植几乎无免疫排斥反应，可接受异系、异种肿瘤肿瘤移植等，有“活试管 ”之称。 自 从 1969 年Rygaard 、Povlesev 二氏将人类肿瘤异种移植于裸鼠首次获得成功后，它在肿瘤研究中已被广泛利用。 目前移植于裸鼠较为成功的人类肿瘤有：结肠癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、宫颈癌、白血病等。裸鼠的缺点动物的选择 裸小鼠的费用昂贵，饲养时对实验室的条件要求高，小鼠不易大量繁殖。因而一般不用于药物的初筛选研究。由于先天性免疫缺乏，因而在一般情况下也不用于免疫药物的研究。 动物的选择C57BL/6小鼠 小鼠类的一种，黑毛，体型小，性情较温顺，易于饲养管理，对药物敏感性好，为研究Lewis肺癌所选小鼠。费用适中，饲养条件不太高，易大量繁殖，因而一般可用于药物的体内初筛选研究。（Lewis肺癌为C57BL/6小鼠来源的肿瘤） 动物的选择大鼠 大鼠也广泛用于肿瘤研究。与小鼠相比，大鼠的体型较大，供给的组织较多，便于进行手术等实验操作。大鼠的肝脏对致癌物质很敏感，可用二乙基亚硝胺，二甲基偶氮苯（DAB）复制大鼠肝癌动物模型，还可用甲基苄基亚硝胺诱发大鼠食管癌动物模型。 大鼠的自发性癌变的发生率较低。动物肿瘤体内实验方法动物的选择金黄地鼠：金黄地鼠是肿瘤学实验研究中最常用的动物，她广泛用于研究肿瘤的增殖、致癌、抗癌、肿瘤转移、康癌药物的筛选等。豚鼠：曾被认为是很少发生肿瘤的动物，近年发现豚鼠也可发生自发性肿瘤，例如支气管乳头腺瘤、白血病等。两栖类动物：蛙类无毛，光滑的皮肤与人类接近，可为皮肤癌的研究提供实验模型。鸟类：鸡和其它鸟类对肿瘤病毒的研究具有极高的实用价值尤其是对于造血系统和间叶组织肿瘤病毒株具有易感性。鱼类：鱼类也可发生不少自发肿瘤，它们对化学致癌物十分敏感，例如用黄曲霉素、二乙基亚硝胺等可诱发鱼类肝脏肿瘤和肾母细胞瘤。其它：许多家畜如马牛羊猪犬猫家兔等都可发生各种肿瘤。动物肿瘤体内实验方法●实 验 动 物 的 选 择●移植性动物肿瘤模型●自发性动物肿瘤模型●诱发性动物肿瘤模型 动物肿瘤体内实验方法移植性动物肿瘤模型●人体肿瘤动物体内移植模型的建立●实体瘤动物体内移植模型的建立 ●非实体瘤动物体内移植模型的建立 移 植 性 动 物 肿 瘤 模 型人体肿瘤动物体内移植模型的建立 用人的肿瘤细胞通过移植的方法移植到适合的动物宿主体内，建立一个移植宿主的体内模型，通过该模型对实验药物进行药理药效学观察。 人体肿瘤动物体内移植可观察癌细胞对药物的敏感性试验，药物对癌细胞的逆转作用，药物对癌细胞的增殖抑制作用和诱导癌细胞的凋亡等作用。移 植 性 动 物 肿 瘤 模 型 人体肿瘤动物体内移植模型的建立●动物要求●肿瘤细胞来源●肿瘤细胞冻存与复苏●肿瘤细胞体内接种人体肿瘤动物体内移植模型的建立动物要求 由于人和动物不同种，存在移植排斥反应，故要用免疫缺陷动物，如裸鼠。 裸小鼠是一种独特的纯系动物，全身无毛，先天性T细胞缺乏，对异种肿瘤移植几乎无免疫排斥反应，可接受人类肿瘤移植。 裸大