动物生物化学课件13 DNA的生物合成—复制.ppt

OH ★合成引物 Dna A Dna B、 Dna C DNA拓扑异构酶 引物酶 SSB 5? 3? 3? 5? 总结： ①复制的起始在原核生物只有一个起始点 （Ori.C），而在真核生物有多个起始点。 ② DnaA， DnaB（解螺旋酶，rep蛋白）和DnaC参与解 链，形成复制叉（replication fork），SSB结合并稳定 解开的单股DNA链；引物酶（DnaG）与上述因子、 酶构成引发体（primosome），并合成RNA引物。解 链造成的超螺旋，由拓扑异构酶实现超螺旋的转型， 即把正超螺旋转变为负超螺旋。 辨认 功能起始点并结合于位点 解开DNA双链 协助解螺旋酶 催化RNA引物生成 稳定解开的单链 理顺DNA链 E.coli的复制起始点 名称 DnaA蛋白(四聚体) 解螺旋酶（DnaB蛋白，rep蛋白） DnaC蛋白 引物酶（ DnaG蛋白） SSB 拓扑异构酶 oriC（245bp的DNA组分） 参与复制起始的各种因子和酶 原 核 生 物 复 制 的 起 始 5’ 3’ 5’ DNA-pol DNA-polDNA-polDNA-pol dGTP dTTP dCTP dTTP dATP dGTP dATP dCTP 3.2.2 DNA链的延伸 DNA聚合酶催化游离的脱氧核苷酸结合 到新链3’末端，使其不断延长。 半不连续复制示意图 这种前导链连续合成，随后链断续合成的 方式，称为半不连续复制。 随后链中合成的多个DNA 片段，称为冈崎 片 段 。 冈 崎 片 段 的 长 度 原 核 细 胞 中 约 1000- 2000 个核苷酸，真核细胞中约100-200 个核苷 酸。 复制叉的推进 ① 先导链的合成 引物酶在复制原点附近合成一段 RNA 引物； DNA聚合酶Ⅲ (原核细胞)在引物的3末 端逐个添加脱氧核苷酸。 随着复制叉的推进，亲代DNA双螺旋不 断被解开，先导链也不断延伸。 ② 随后链的合成 引物的合成 ：随后链的每个冈崎片段都需要合成 RNA引物。也是由引物酶催化。 冈崎片段的合成：DNA聚合酶Ⅲ(原核细胞)在引物的3 末端使DNA链延伸，直至抵达其下游的另一个冈崎片 段的RNA引物的5端。 冈崎片段的连结：DNA聚合酶Ⅰ一面以其DNA聚合活 性在上游冈崎片段的 3-OH末端添加脱氧核苷酸，一面 以其5→3核酸外切活性切除引物，直至将引物全部切 除。DNA连接酶将最后的缺口补好。 ③ 先导链和随后链中DNA的延伸由同一个DNA聚合 酶Ⅲ全酶二聚体催化 随后链的模板回折成环，从而使冈崎片段的延伸方 向与先导链的延伸方向一致，它们的3末端分别落在 DNA聚合酶Ⅲ全酶的双活性部位。因此，随着聚合酶 的移动，两条链同时延伸。 复制叉的结构 * 第13章 DNA的生物合成 —复制（Replication） 本章主要内容： ? 中心法则 ? ? DNA复制的半保留性 参与DNA复制的酶类和蛋白因子 ? DNA的复制过程 ? DNA的损伤和修复 ? 反转录 现代生物化学和分子生物学的一个最基本的观点-- 在生命有机体中，基因是唯一能够复制，并且能永远存 在的单位， 而其意义最终须通过蛋白质才体现出来。 从DNA到蛋白质，遗传信息的流动遵循着中心法则。 1.中心法则 2. DNA的半保留复制 半保留复制(semiconservative replication)： 复制时，亲代的双链DNA解开成两条单 链，然后各自作为模板指导合成新的互补链。 所形成的两个子代DNA分子与亲代DNA分子 碱基顺序完全相同—复制。每个子代DNA 分子中的一条链来自亲代，另一条链为新合成 的—半保留。 2. DNA的半保留复制 半保留复制实验依据 1958年M.Messelson 等用 实验加以证实 双螺旋结构是半保留复制 的分子基础 半保留复制的意义 复制 的这种方式可保证亲 代的遗传特征完整无 误的传递给子代，体 现了遗传的保守性。 复制 DNA的生物合成 逆转录 复制（replication）：即DNA的生物合 成，以亲代DNA为模板合成两个完全相同的 子代DNA分子的过程。 复制的反应 d ATP d CTP d GTP d TTP DNA聚合酶 DNA模板 DNA+（ n1+n2+n3+n4)PPi PPi随即被焦磷酸酶水解，从而推动聚合反应的进行。 DNA 复制是在酶的催化下的脱氧核苷酸聚合 过程。需要4种dNTP为底物外，还需要多种酶、 蛋白因子、亲代DNA单链模板及RNA引物。 3. DNA的复制过程 3.1 与复制有关的酶和因子 原核生物：以大肠杆菌为例 1. 原