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4、非离子型聚合物沉淀法 非离子型聚合物沉淀法沉淀作用的机理尚不清楚，大致有如下解释： （1）聚合物与生物大分子发生共沉淀作用。 聚合物有较强的亲水性，使生物大分子脱水而发生沉淀。 聚合物与生物大分子之间以氢键相互作用形成复合物，在重力作用下形成沉淀析出。 通过空间位置排斥，使液体中生物大分子被迫挤聚在一起而沉淀。 （2） （3） （4） 四、沉淀与结晶分离技术 四、沉淀与结晶分离技术 常用非离子型聚合物主要有聚乙二醇（PEG）、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）和葡聚糖等，最常用的是PEG4000和PEG6000。 该沉淀法的优点包括： （4）沉淀后聚合物易采用超滤、萃取等方法去除。 （1）操作条件温和，室温下即可完成，不易引起蛋白质变性。 （2）沉淀物形成颗粒大，易收集。 （3）沉淀效能高，使用很少的聚合物即可沉淀相当多的蛋白质。 四、沉淀与结晶分离技术 5、其他沉淀方法 选择性沉淀法：利用蛋白质对某些物理或化学因素敏感性的不同，有选择的使杂质蛋白质发生变性沉淀，达到分离提纯的目的。 金属离子沉淀法：通过某些金属离子能与蛋白质分子中的特殊部位（如羧基、氨基、杂环）发生反应，造成等电点的转移，从而降低蛋白质的溶解度而沉淀。 四、沉淀与结晶分离技术 二、结晶法 所谓结晶是指物质以晶体的状态从溶液或蒸气中析出的过程。 任何固体物质与其溶剂相接触时，由于分子的热运动，必然发生两个过程：①固体的溶解；②固体的析出。当固体溶解和析出的速度达到平衡时，称该溶液为饱和溶液。 溶解度：在一定温度下，某固态物质在100g溶剂中达到饱和状态时所溶解的溶质的质量，叫做这种物质在这种溶剂中的溶解度。 四、沉淀与结晶分离技术 （1）对于溶解度曲线随温度变化敏感的物质，可选用变温方法结晶分离； （2）对于溶解度曲线随温度变化缓慢的物质，可采用移除一部分溶剂的方法分离。 四、沉淀与结晶分离技术 结晶是从均一的溶液中析出固相晶体的过程，包括以下三个步骤： （1）过饱和溶液的形成 过饱和是结晶的首要条件，也是结晶过程的推动力。得到过饱和溶液的方法一般有4种： ① 冷却热饱和溶液 ② 蒸发溶剂 ③ 发生化学反应 ④ 盐析法 四、沉淀与结晶分离技术 （2）晶体的生成 晶核：过饱和溶液中最初生成的微小晶粒，不断生成并继续成长为晶体，是晶体成长过程中必不可少的。 成核方式 初级成核 二次成核 均相初级成核 非均相初级成核 四、沉淀与结晶分离技术 （3）晶体的成长 在过饱和溶液中，溶质质点在过饱和度推动力作用下，向晶核或加入的晶种运动，并在其表面有序堆积，使晶核或晶种不断长大形成晶体。所得晶体的大小取决于晶核形成速度和晶体成长速度的关系。 晶核形成速度 晶体成长速度 ＞＞ 大量晶核，产品小而多 晶核形成速度 晶体成长速度 ＜＜ 产品颗粒大而均匀 四、沉淀与结晶分离技术 影响晶核形成速度和晶体成长速度的因素也就是影响结晶操作的因素。 影响因素有过饱和度、温度、粘度、晶种、搅拌、杂质等。 五、色谱分离技术 原理：在色谱分析中，当流动相携带样品通过色谱的固定相时，样品分子与固定相分子之间发生相互作用，使样品分子在流动相和固定相之间进行分配。与固定相分子作用越大的组分向前移动速度越慢，与固定相分子作用越小的组分向前移动速度越快，经过一定距离以后，由于反复多次的分配，使原本性质（沸点、极性等）差异很小的组分之间可得到很好的分离。 色谱分离技术 五 创始人：茨维特（Tsweet） 用碳酸钙作吸附剂，分离植物绿叶的石油醚萃取物得到黄色、绿色和灰黄色彼此分离的六个色带。 色谱分离技术又称层析分离技术或色层分离技术，它是利用不同物质在由固定相和流动相构成的体系中具有不同的分配系数，当两相作相对运动时，这些物质随流动相一起运动，并在两相间进行反复多次的分配，从而使各物质达到分离。 色谱分离共同点： ① 必须有固定相和流动相两相物质存在。 ② 物质分离必须借助于流动相相对于固定相移动。 ③各组分与两相物质作用力不同，通过差速运动达到分离。 五、色谱分离技术 色谱法的分类 分离机理 吸附色谱法 分配色谱法 离子交换色谱法 凝胶色谱法 亲和色谱法 操作方法 柱色谱法 纸色谱法 薄层色谱法 流动相物态 气相色谱法 液相色谱法 超临界流体色谱法 五、色谱分离技术 与其他分离纯化方法相比，色谱分离具有以下优点： ① 分离效率高 ② 应用范围广 ③ 选择性强 ④ 设备简单，操作方便 ⑤ 在线检测灵敏度高，分离快速 五、色谱分离技术