电泳法和高效毛细管电泳法ppt课件.ppt

第10章 电泳法和高效毛细管电泳法;;;10.1.2 毛细管电泳的原理;第10章电泳法和高效毛细管电 10.1.3 分离模式;第10章 毛细管电泳 10.1.3 分离模式1 毛细管区带电泳（CZE） ;第10章 毛细管电泳 10.1.3 分离模式2 胶束电动毛细管色谱;胶束电动色谱的应用特点: 使毛细管电泳不仅能分离离子化合物，而且还能分离中性化合物. 比高效液相色谱更为高效. HPLC 分离柱效为5000－25000理论板数/m MECC 可达到50000－500000理论板数/m 比高效液相色谱更为高速.MECC分离时间通常小于30min，但达到相仿效率的毛细管LC，需要更长的时间。 ;第10章 毛细管电泳 10.1.3 分离模式3 毛细管凝胶电泳;毛细管凝胶电泳的特点： 综合了电泳技术和平板凝胶电泳的优点 ， 电泳峰尖锐，柱效极高 短柱上实现极好的分离 试样容量为10－12g 主要缺点:制备柱较困难，寿命较短 已成为分离分析生物大分子如蛋白质、多肽、核酸、DNA等强有力的工具。例应用CGE分离与激光诱导荧光检测相结合，用于DNA序列快速分析。 ;第10章 毛细管电泳 10.1.3 分离模式5 毛细管电色谱;第10章 毛细管电泳 10.1.3 分离模式6 毛细管等电聚焦; 进样－等电聚焦－检测 先将脱盐的试样（蛋白质）以≥1％的浓度与两性电解质溶液混合，用压力进样充入毛细管柱(阳极端)，置于阳极电解质溶液如H3PO4中，检测端为阴极端，置于阴极电解质如NaOH中。 施加电压，进行电泳实验。两性电解质离子形成pH的位置梯度，而蛋白质在迁移时会在其等电点的pH区域内停止移动。这样pI不同的蛋白质各组分会在毛细管内很窄的不同pH区域内聚焦. 在阳、阴极电解液中加入盐如NaCl或NaOH,破坏pH梯度，使各组分蛋白质重新带电，在电场力作用下发生迁移、检测，使不同组分的蛋白质得到分离。;毛细管等电聚焦特点: 等电聚焦实际上也是一个试样浓缩过程，这一过程可用于浓缩试样组分。 具有极高的分辩率，可以分离等电点相差0.01pH的两种蛋白质. 注意:电渗流的存在会破坏聚焦区带的稳定 ;第10章 毛细管电泳 10.1.3 分离模式 7 毛细管等速电泳;等速电泳所要求的条件: ;区带电泳和等速电泳使用的电解质溶液的不同; 2. 背景电流要小到足以克服区带电泳效应 在毛细管等速电泳中, 由于没有一个背景电解质支持电流 (毛细管等速电泳要求溶剂的自身电导可以忽略不计 ), 各区带互相连接. ;;毛细管等速电泳一般用恒流操作模式.分离开始后, 在电压的作用下, 各组分由于淌度的不同被分离. ;第10章 毛细管电泳 10.2.3 理论效率及表示方法 ;; ⑴高压电源:0-30kv连续可调的直流高压电源 ⑵毛细管柱： 内径25-75μm,常用50和75μm 材料：石英为主，长度30-70cm, 凝胶柱20cm左右。 ;（3） 进样方法 Ⅰ 电动力学进样 也称电迁移进样.; 样品;(4 ) 检测器;(4 ) 检测器;10.4 毛细管电泳在医药中的应用; A 对照品的电泳图谱 B 样品的电泳图谱 （背景电解质