生物物理学-2015年第09讲+NMR核磁共振技术的应用.pptVIP

核磁共振基本原理 核磁共振基本原理 自旋耦合(spin coupling) NOE效应 由于二个核的空间位置很靠近，相互弛豫较强，当A受到磁照射达饱和时, 它要把能量转移给B，于是B吸收的能量增多，共振信号增大。这一效应的大小与核间距离的六次方成反比。 自旋偶合是解决氢基团之间相邻的关系，它们之间的能量是通过键(n3)传递的。NOE效应是描述氢原子之间的空间相近。 发展历史 1924年Pauli假设?特定的原子核具有自旋和磁矩，放入磁场中会产生能级分裂 1952年Stanford大学的Bloch和Harvard大学的Purcell各自独立证实了上述假设，获Nobel Prize 1953年，诞生第一台NMR仪器?FT-NMR 1991年，Ernst 对高分辨核磁共振方法发展，获Nobel Prize 2002年，生物大分子的核磁分析获Nobel Prize 从2002年诺贝尔化学奖说起 溶液中测定生物大分子结构 首个利用NMR测定的蛋白 利用NMR测定蛋白感染素 1997 年,维特里希应用NMR 方法首次测定了 蛋白感染素(prion protein) 的结构。 作业: 在PDB数据库里面查找1AG2的三维结构，并 决定在结构中有几个beta-sheet(β折叠)和 alpha-helices(α螺旋), 并结合以前学到的知 识，简要阐述为什么这样的结构具有传染 性。(提示: 可查找原始文献) NMR技术主要优点 蛋白质处于溶液状态，适合研究蛋白质-蛋白质，蛋白质-核酸以及蛋白质-配体相互作用； 可研究膜蛋白； NMR技术主要优点 操作测量相对简单，精度较高； 现在大约15-20%的新蛋白质的结构由核磁共振方法得到； NMR蛋白结构确定的基本原理 NMR蛋白结构研究的步骤 可行性验证 必须判断多肽或蛋白质是否在溶液中聚集 必须判断蛋白质的折叠态是否对温度和pH稳定 必须判断化学位移的分散度是否足够大 一般来讲在溶液中测定的蛋白质大小上限为300个残基左右 NMR蛋白结构研究的步骤 选择最适的温度，pH值及溶剂条件进行一系列核磁实验； 进行谱峰证认, 即确定不同核磁谱上的各个谱峰对应的蛋白质中原子； 获得一系列与空间结构相关的信息如NOE等, 用距离几何或分子动力学方法计算空间结构。 磁共振技术在医学上应用 MRI (核磁共振摄影) -2003年诺贝尔医学奖第一台原型机由Paul C. Lauterbur在SUNY-Stony Brook发明 磁共振技术在医学上应用 机器造价高，检查费用高 检查时间相对较长。 身体有不能除去的金属异物如心脏起博器、固定支架等绝对不能做核磁共振检查，此为禁忌症。 遗留在体内的金属铁离子影响图像质量，甚至不能做诊断。 Ernst(1991.诺贝尔奖得主) 曾形象的把核磁共振技术比喻成一棵大树，发展最早和应用最早领域是在物理学即树根，而后是在生物化学领域的应用即树干，在后来是枝繁叶茂的医学等领域应用。NMR技术就像是一架梯子，使我们取得越来越多的硕果。 Labeling method (标记方法) NMR detection of H/D exchange The End * NMR Spectroscopy in Biophysics 核磁共振技术的生物物理学应用 半数以上的原子核具有自旋，旋转时产生一小磁场。 当加一外磁场，这些原子核的能级将分裂，即塞曼效应。 B (magnetic field) Energy nuclear spin, I=? +? -? 产生核磁共振的基本条件 核磁共振基本原理 The spectrometer Figure. 测定在强磁场中的样品。图中标示出了在液氮和液氦冷却下 的核磁仪内部，把脉冲无线电波发射到样品上，从而得到样品的响 应电频信号，分析此响应信号即得到NMR谱图。 化学位移 (The chemical shift) 化学位移取决于原子的化学环境: ? the atom type (NH, aliphatic CH, aromatic CH, ...) ? the amino acid type (Ala, Phe, ...) ? the chemical (spatial) environment The resonant frequency of a certain atom is called chemical shift. For convenience, the chemical shift is expressed as follows: n(sample) – n(reference) spectrometer frequency (ppm) = 106 ? The 1D spectrum