中药对AI325＿35损伤的SHSY5Y细胞的保护作用.pdfVIP

上海中医药大学学报 第27卷 第5期 2013年9月 ·77· 中药对 AI325_35损伤的SH—SY5Y细胞的 保护作用 胡海燕 金国琴 张学礼 许言午 夏花英 郑 静 上海中医药大学基础医学院 (上海 201203) 摘【 要】 目的：研究阿尔兹海默病(Alzheimerdisease，AD)治疗常用中药熟地黄、黄芪等几种单味药及中 药复方左归丸对 B淀粉样蛋白(Ap)产生及聚集的影响，以探讨中药对 AD的保护作用。方法：用 AB： 对 人神经母细胞瘤 SH．SY5Y细胞进行损伤 ，制备AD细胞模型。采用刚果红染色、MTT法检测熟地黄 、黄芪 、 石菖蒲等中药对Ap聚集的影响；Rea1．timePCR方法观察这几种中药的药物血清对细胞的p淀粉样蛋白前 体 (APP)基因、B一分泌酶、一分泌酶表达的影响。结果：刚果红染色结果显示，山茱萸、黄芪 、当归和左归丸 可以抑制 AB 聚合，形成长的淀粉样原纤维；熟地黄 、山茱萸、黄芪、当归、左归丸对Ap所致细胞的损伤 均有保护作用，并呈现剂量依赖关系 ；低浓度的石菖蒲及远志能够保护细胞，但高浓度的石菖蒲和远志对 细胞无保护作用。实时定量PCR结果显示，熟地黄、黄芪、左归丸对APP、31-分泌酶及 ^y一分泌酶的mRNA表 达均有不同程度的抑制；当归能抑制 3-分泌酶mRNA的表达。结论：熟地黄、山茱萸、黄芪 、当归等中药及 左归丸对 AB损伤的神经细胞均有保护作用，其可能是通过抑制 APP、3-分泌酶及 一分泌酶mRNA的表达， 从而减少A31的产生及聚集、降低A31的沉积 ，以达到防治AD的作用。 【关键词】 阿尔茨海默病；中药 ；B淀粉样蛋白；SH—SY5Y细胞；保护作用 【中图分类号】 R285．5 【文献标志码】A 【文章编号】1008—861X(2013)05—0077—05 阿尔兹海默病 (Alzheimerdisease，AD)即老年 研究对象，采用 Ap： 对人神经母细胞瘤细胞 sH— 性痴呆症，是一种慢性、进行性的脑神经退行性疾 SY5Y进行损伤制备AD细胞模型，通过动物实验和 病，主要表现为认知功能障碍。其病理特征为相对 体外实验，研究药物对A31形成的影响及其对AD脑 特异性的老年斑、神经纤维缠结并伴有神经元的损 神经细胞模型的保护作用。 伤。关于其发病机制的假说很多，其中以B淀粉样 1 材料与方法 学说为研究者所公认。该学说认为 B淀粉样蛋 白 (31-amyloid，A31)由B淀粉样蛋 白前体 (31-amyloid 1．1 实验动物与细胞株 2月龄雄性 SD大鼠，40 precursorprotein，APP)经 p一分泌酶 (p—secretase)和 只，体质量 (250±20)g，购 自上海中医药大学动物 ^y一分泌酶 (一secretase)切割后产生，A31的沉积会引 实验中心，动物合格证号：SCXK(沪)2007．0005，在 发神经毒性、氧化损伤、炎症反应等一系列的效应， 清洁级环境中饲养。SH—SY5Y细胞株 (ATCC号： 最终导致AD发病…。 目前AD尚无有效的治疗方 CRL．2266)，购 自中国科学院上海细胞所。 法，中药常被用于改善学习和记忆，因此也用于AD 1．2 药品、试剂和仪器 熟地黄等中药购 自上海药 治疗 。补 肾平肝、补气活血、祛痰除湿类的药物常 材公 司。A31： 短肽购 自Sigma公 司，MEM／F12 被用于AD治疗 J。而现代医学研究也发现这些 (1：1)等培养液购 自Gibco公司，引物 由上海生工 药物具有抗氧化、抗炎、激素样等作用。为此，本研