罗氏沼虾幼体感染双顺反子病毒后SSH文库的构建及精氨酸激酶基因的研究-生物学专业毕业论文.docxVIP

温州医科大学硕士学位论文目录 温州医科大学硕士学位论文 目录 目录 ．．．．．．．．．．．．．． ．．．．．．． ．．． ．．． ．．．．．．．．1 缩略词袁 ．．．． ．．． ．．．．．．．．．．．．．． ． ．．．．．．．．． 3 罗氏沼虾幼体感染双顺反子病毒后SSH文库的构建及精氨酸激酶基 因的研究 ．．．． ．．． ．． ．．．． ． ．．．．．．．．．．． 6 中文摘要 ．．．． ．．． ．．．．．．．．．． ． ． ．．．．．．．．． 6 ABSTRACT．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．9 引言．．．．．．． ．．．． ．．．． ．．． ．．．．． ．．．．．．．．．．．．．．1 3 本研究的目的和意义．． ．． ．．．．．． ．．．． ． ．． 1 5 第一章罗氏沼虾幼体感染双顺反子病毒后SSH文库的构建．．． 1 7 1材料． ．．．．． ．． ． ．．． ．． ．．．．．．1 7 1．1实验材料 ．．．．． ．．．．．．．．．．．． ．．．．．1 7 1．2实验试剂和试剂盒．．． ．．．．．．．．．． ．．． ．．．．1 7 1．3缓冲液和常用试剂配制．．．． ． ．．1 8 1．4主要仪器设备．．． ．．．．．．． ．． ．．．．．．1 8 2方法． ．．． ．．．．．．．．．．．． ．．． ．．．．1 9 2．1双顺反子病毒提取 ．．．．．．．．． ．． ．．．1 9 2．2实验动物及其处理 ．．．．．．．．．．．．． ．．．．1 9 2．3用TR I I提取总RNA． ． ．．．．．．． ．．． 1 9 2．4 SMART双链cDNA合成． ． ． ．20 2．5消减文库的构建．．． ．．．．． ．． ．．． ．．． 25 2．6阳性克隆的培养．．．． ．．．．．．．．．．．． ．．． ．．．25 2．7 PCR方法鉴定阳性克隆 ．．．．．．．．． ． ．．． 26 2．8测序及序列分析 ．．．．．．． ．． ．．．． 26 2．9差异性验证 ．．． ．． ．．．．．．．．．．．．．． ．．．．26 3结果． ．．．．． ．．．．．．．．．．．．．． ．．． ．．．27 3．1总RNA的制备 ．．．．． ．． ．．27 3．2抑制性消减杂交．．．．． ．．．．．．．．．．．． ．． 29 3．3消减文库的构建 ．．．． ．．．． ．．． ．．． ．．29 3．4消减文库插入片段的鉴定．．． ．．．．．．． ． ．．．．．．30 3．4测序结果分析．．．．．． ．．．．．．．．．．．．．．． ．．． 30 3．5差异性验证 ．．．．．．． ．．．． ．． ．38 万方数据 温州医科大学硕士学位论文4讨论．．．．． 温州医科大学硕士学位论文 4讨论．．．．． ．．．． ．．．．．．． ．．． ．．．．．．．． ．． ．．．42 第二章精氨酸激酶基因的cDNA克隆及其在双顺反子病毒感染后的 袁达特征研究 ．． ．． ． ．．．43 1材料 ．．． ．．．．．．．．．．．．． ． ．．．．． ．． ．．43 1．1实验材料 ． ． ．．．． ． 43 1．2实验试剂和试剂盒 ．． ． ． ．．．．．．． ．．．．．．43 1．3缓冲液和常用试剂配制 ．44 1．4主要仪器设备 ．．．． ．．．．． ．．．44 2实验方法．．．．．．．．． ．．．．．． ．．． ．．．．．．． ．．．45 2．1罗氏沼虾病毒感染．．．．．．．．．．．．． ．．．．． ． ．．．．45 2．2总RNA提取 。。45 2．3罗氏沼虾AK基因全长cDNA序列克隆 ． ．．．．． ．45 2．4测序及序列分析 ．．．． 50 2．5罗氏沼虾AK基因表达分析．． ．．．． ． ．．．50 3结果 ． ． 51 3．1罗氏沼虾AK基因全长序列的克隆和特征分析 ．． ．51 3．2同源性及进化树分析．．． ．． ．．．．．． ． ．．． 53 3．3罗氏沼虾AK基因蛋白结构分析及比对．．．．．．．．． ．．．．．．56 3．4罗氏沼虾AK基因在不同时间的mRNA表达差异 ．．58 4讨论 ． ．．． ．．．．．． ． ．． ．58 第三章结论．． ．． ．．． ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．60 致 谢．．．． ．．．．． ．．．．．．．． ．．．． ．．． ．．． ．．．64 文献综述． ．．． ．．．．． ．．．．．．． ．．．．．．．．．．．．．．．．．65 罗氏沼虾病害情况研究．．．．．． ．．．．．．． ．．．．