毛竹细胞骨架微管蛋白基因PeTua3和PeTub3研究-园林植物与观赏园艺专业毕业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 Dissertation for the Degree Studies on PeTua3 and PeTub3 Encoding Microtubulin of Cytoskeleton in Moso Bamboo (Phyllostachys edulis) Candidate: Li Caili Super visor : Prof. Peng Zhenhua Associate Super visor : Prof. Gao Zhimin Academic Degree Applied for : Ph.D Speciality: Ormamental Plants and Horticulture Date of Defence : June, 2012 Degr ee-Conferr ing-Institution: Chinese Academy of Forestry 独 创 性 声 明 本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表 或撰写过的研究成果，也不包含为获得本研究生培养单位或其它教育机构的学位或证书 而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确 的说明并表示谢意。 学位论文作者签名： 日期： 年 月 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解中国林业科学研究院有关保留、使用学位论文的规定，中 国林业科学研究院有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论 文被查阅和借阅。本人授权中国林业科学研究院可以将学位论文的全部或部分内容编入 有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 （保密的学位论文在解密后适用本授权书） 学位论文作者签名： 导师签名： 年 月 日 年 月 日 学位论文作者毕业联系方式 工作单位： 联系电话： 电子邮件： 通讯地址、邮编： 万方数据 万方数据 摘 要 竹林是我国重要的森林资源，竹材是由各种类型细胞的细胞壁及其包围的空间所组 成的复杂生物材料，因其具有强度高、韧性好、硬度大等特点而在建筑、造纸等领域得 到广泛的利用。竹子优良的材性特点与其细胞壁的组成及结构密切相关，竹子细胞壁的 发育对竹子的生长发育、生理特性、生化代谢以及对外界环境胁迫的有机反应发挥着重 要的调节作用，对竹子材性的形成起着决定性作用。细胞骨架指导细胞壁的生物合成， 作为细胞骨架的重要组成部分，微管蛋白在细胞壁发育过程中起着重要的调控作用。 本 研究以我国重要经济竹种--毛竹（Phyllostachys edulis）为材料，分离细胞骨架微管蛋白 基因，在对其序列进行充分分析的基础上，通过体外表达和在模式植物中的表达来验证 其功能，以其为通过基因工程手段培育竹类植物新品种奠定基础。主要研究结果如下： 1、采用 RT-PCR 方法从毛竹叶片中克隆了 2 个微管蛋白基因，分别命名为 PeTua3 和 PeTub3。PeTua3 的编码区为 1353 bp，编码 451 个氨基酸；PeTub3 的编码区 1341 bp， 编码 447 个氨基酸。 2、Blast 分析表明 PeTua3 和 PeTub3 与已报道的其它植物的 tubulin 蛋白具有很高的 相似性，分别属于 tubulin 蛋白的 Tua3 和 Tub3 家族，都是疏水性酸性蛋白。通过 MOTIFSCAN 软件预测蛋白质的功能性位点，结果显示 PeTua3 和 PeTub3 序列均包含有 N-糖基化位点、磷酸化酪蛋白激酶 II 位点、N-肉豆蔻酰化位点和磷酸化蛋白激酶位点、 GTP 酶域和 C 末端结构域，但是这些位点在蛋白序列中的位置、数量均存在一定的差异， 这意味着它们可能存在功能上的不同。应用 MEGA4.0 软件，构建基于 tubulin 蛋白的系 统进化树，结果表明：PeTua3 与水稻的 Tua3 蛋白在进化关系上最近，Petub3 与牛筋草 的 Tub3 蛋白在进化关系上最近，而与大部分双子叶植物 Tubulin 蛋白的关系较远，这与 毛竹属于单子植物禾本科竹亚科的形态学分类相吻合。 3 、 通 过 构 建 PeTua3 和 PeTub3 基 因 的 原 核 表 达 载 体 pET-32b-PeTua3 和 pET-30a-PeTub3，分别转化大肠杆菌(Escherichia coli) 菌株 DE3，进行基因的体外表达研 究。经过优化诱导表达条件，在 37℃，0.4 mmol·L-1 IPTG 诱导 2 h 的条件下获得高丰度 I 万方数据 万方数据 的 PeTua3 可溶性