实验二蛋白质的性质实验一.pptVIP

西南大学药学院生物制药实验室 实验二 蛋白质的性质实验（一）蛋白质及氨基酸的呈色反应 实验目的 了解构成蛋白质的基本结构单位及主要连接方式 了解蛋白质和某些氨基酸的呈色反应原理。 学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法。 定量测定蛋白质的方法： 凯氏定氮法 双缩脲法 茚三酮法 Folin-酚（lowry法） 考马斯亮蓝G250法 紫外吸收法 实验原理 双缩脲反应 蛋白质含有两个以上的肽键，因此有双缩脲反应。在碱性溶液中蛋白质与Cu2+形成紫红色络合物，其颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比，而与蛋白质的分子量氨基酸成分无关，因此利用此进行比色测定蛋白质含量。 在一定条件下，未知样品的溶液与标准蛋白质溶液同时反应，并于540—560nm下比色，可以通过标准蛋白质的标准曲线求出未知的蛋白质浓度，标准蛋白溶液可以用结晶的牛（或人）血清白蛋白、卵清蛋白或酪蛋白粉末配制。 实验原理 实验原理 黄色反应 蛋白质溶液遇硝酸后先产生白色沉淀加热则白色沉淀变成黄色再加碱颜色加深呈橙黄色这是因为硝酸将蛋白质分子中的苯环硝化产生了黄色硝基苯衍生物( 硝醌酸钠）。绝大多数蛋白质均含有芳香族氨基酸，因此都有黄色反应 实验原理 考马斯亮蓝反应 实验仪器及试剂 考马斯亮蓝G250 0.5%苯酚 浓硝酸 0.1%茚三酮 尿素 1%硫酸铜 2%卵清蛋白溶液 实验步骤 双缩脲反