氯丙烯对大鼠神经组织和细胞中β-actin和β-tubulin骨架蛋白的影响-毒理学专业毕业论文.docxVIP

原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独 原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独 立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不 包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研 究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完 全意识到本声明的法律责任由本人承担。 论文作者签名：—— 日 期： 关于学位论文使用授权的声明 本人完全了解山东大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学 校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论 文被查阅和借阅；本人授权山东大学可以将本学位论文的全部或部分 内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段 保存论文和汇编本学位论文。 (保密论文在解密后应遵守此规定) 论文作者签名：——导师签名：——日 期： 山东大学硕士学位论文氯丙烯对大鼠神经组织和细胞中 山东大学硕士学位论文 氯丙烯对大鼠神经组织和细胞中 B．actin和13-tubulin骨架蛋白的影响 研究生段化伟 导师谢克勤 教授 中文摘要 目的氯丙烯是一种重要的化工原料，它可以引起中毒性周围神经病，但是其 发病机制还不清楚。t3．actin一直被认为是多数器官组织和细胞培养中表达稳定的 保守蛋白，常用做基因表达时的标准参照。但是B．actin和B．tubulin也是神经系 统细胞骨架的主要成分。为了建立合适的氯丙烯亚慢性大鼠中毒模型，进一步探 讨氯丙烯引起的周围神经病的发病机制，以及研究毒物是否会对神经组织13．actin 产生影响。我们给Wistar大鼠皮下氯丙烯染毒三个月，取出其神经组织，测定其 中13．actin含量的变化。 方法 1．整体实验 将Wistar大鼠分为雄性成年、雄性老年和雌性成年大鼠三个受 试组。处理组氯丙烯皮下注射85mg／kg(低剂量)和170mg／kg(高剂量)，雄性 老年和雌性成年大鼠只有170 mg／kg处理组，每周五d，连续三个月。通过称量体 重，结合甩尾实验、后肢撑力实验和抓网格实验，观察中毒大鼠的神经行为功能 改变。用Western Blot方法分析各实验组大鼠大脑、脊髓和坐骨神经沉淀和上清中 B—actin含量的变化。 2．离体实验原代培养的新生乳大鼠大脑和脊髓细胞氯丙烯染毒24小时后， 用免疫组织化学方法测定乳大鼠大脑和脊髓细胞中B．actin和B．tubulin含量的变 化。 结果 1．体重及神经功能测试： 在实验结束时。1)各处理组体重都有显著降低。 雄性成年高剂量组降低19．18％(P0．01)：雄性老年高剂量组降低14．26％(P O．01)：雌性成年大鼠处理组降低11．1l％(PO．01)。2)各处理组甩尾实验结果表 现不同。雄性成年高剂量组减少40．71％(P0．01)，雄性老年高剂量组减少32．02％ (P0．01)，雌性成年大鼠处理组没有明显改变。3)后肢撑力指数在各处理组增 l 山东大学硕士学位论文 山东大学硕士学位论文 加。雄性成年高剂量组增大27．72％(PO．01)：雄性老年高剂量组增大13．08％ (P0．05)；雌性成年大鼠处理组增加15．37％(P0，01)。4)各处理组网格实验 结果不同。雄性成年高剂量组大鼠在网格上停留时间减少35．42％(PO，01)； 雄性老年高剂量组减少24．22％(Po．05)；雌性成年大鼠处理组没有明显改变。 2．Western Blot结果： 氯丙烯对亚慢性中毒大鼠各神经组织中8．actin含量的 影响不同。 1)在大脑组织中呈降低趋势。在大脑沉淀中，B．actin含量在低剂量组降低 9．47％(p0．05)，高剂量组降低13，17％(p0．01)：在大脑上清中，13．aetin含 量在低剂量组降低20％(130．01)，高剂量组变化不明显。 2)在脊髓组织中，B．aetin含量显示出升高趋势。在脊髓沉淀中，低剂量组 升高1．85％，高剂量组升高43．29％(p0．01)；在脊髓上清中B—actin变化不明显， 在低剂量组和高剂量组分别升高4％和1％。 3)在坐骨神经沉淀中B+aetin的变化趋势与脑沉淀的变化相同，在低剂量组 和高剂量组分别下降32．88％和38．89％(p0．01)：在坐骨神经上清中，B-aetin没 有明显变化。 3．免疫组织化学结果： 与对照组相比，0．06 mmol／L和O．12 mmol／L氯丙烯 染毒后，B．actin含量在大脑细胞中分别降低52．27％和84．74％(p0．01)：在脊髓 细胞中分别降低52．57％和80．21％(pO．01)。氯丙烯相同浓度染毒后，t3一tubulin 在大脑细胞中降低45．79％和83．53％(p0。01)。 结论 1．氯丙烯具有明显的