活性污泥中的腐殖酸对实时荧光定量PCR的影响.pdf

第 ３８卷第 １期 环　 境　 科　 学　 学　 报 Ｖｏｌ．３８，Ｎｏ．１ ２０１８年１月 　Ａｃｔａ Ｓｃｉｅｎｔｉａｅ Ｃｉｒｃｕｍｓｔａｎｔｉａｅ Ｊａｎ．，２０１８ ＤＯＩ：１０．１３６７１／ｊ．ｈｊｋｘｘｂ．２０１７．０３２６ 倪敏，刘婷婷，顾海东，等．２０１８．活性污泥中的腐殖酸对实时荧光定量ＰＣＲ的影响［Ｊ］．环境科学学报，３８（１）：２０１⁃２０７ Ｎｉ Ｍ，Ｌｉｕ Ｔ Ｔ， Ｇｕ Ｈ Ｄ， ｅｔ ａｌ． ２０１８．Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｈｕｍｉｃ ａｃｉｄ ｉｎ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｓｌｕｄｇｅ ｏｎ ｒｅａｌ⁃ｔｉｍｅ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＰＣＲ［Ｊ］．Ａｃｔａ Ｓｃｉｅｎｔｉａｅ Ｃｉｒｃｕｍｓｔａｎｔｉａｅ，３８（１）：２０１⁃２０７ 活性污泥中的腐殖酸对实时荧光定量ＰＣＲ 的影响 １，２ １，２ １，２ １，２ １，２，∗ 倪敏 ，刘婷婷 ，顾海东 ，李祥 ，潘杨 １． 苏州科技大学江苏省环境科学与工程重点实验室，苏州２１５００９ ２． 苏州科技大学环境科学与工程学院，苏州２１５００９ 收稿日期：２０１７⁃０６⁃０７　 　 　 修回日期：２０１７⁃０８⁃０７　 　 　 录用日期：２０１７⁃０８⁃１６ 摘要：活性污泥基因组中的腐殖酸会影响实时荧光定量ＰＣＲ检测的准确性．本研究采用抽提基因组前腐殖酸去除试剂盒、抽提基因组后腐殖 酸去除试剂盒、抽提基因组前后共同去除试剂盒３种不同的方法，去除活性污泥基因组中的腐殖酸，经过ＰＣＲ和实时荧光定量ＰＣＲ方法的验 证找出腐殖酸去除的最适方法；通过ＤＮＡ酶 Ⅰ消化基因组ＤＮＡ保留杂质腐殖酸，向其中掺入已知浓度的总细菌质粒，５个浓度１０倍梯度稀释 －１ 报 １０ ｎｇ·μＬ 的定量模板，探究腐殖酸和梯度稀释模板对活性污泥总细菌实时荧光定量ＰＣＲ 的影响．结果显示，在不同处理组中，通过反复洗脱 －１ 的方式在基因组抽提前去除活性污泥中的腐殖酸，ＤＮＡ 的得率（１６２．４６ ｎｇ·μＬ ）最多，Ａ２６０／ ２３０值为１．３４，Ａ２６０／ ２８０值为１．８０，腐殖酸的残留最少； 去除腐殖酸后外加内标质粒组，梯度稀释１０ ｎｇ·μＬ－１模板 １００倍及以上，腐殖酸的抑制效应显著降低后保持不变（ｐ＜０．０５），１００倍以内变化不 显著（ｐ＞０．０５）；抽提前去除腐殖酸组进行实时荧光定量ＰＣＲ的抑制效率为６．１６％，显著低于对照组的７２．６８％（ｐ＜０．０５）．研究表明，抽提前去除 活性污泥腐殖酸，抽提后将基因组模板稀释１００倍可显著降低活性污泥实时荧光定量ＰＣＲ的抑制效率，提高定量结果的准确性． 学 关键词：腐殖酸；稀释模板；活性污泥；实时荧光定量ＰＣＲ；抑制效率 文章编号：０２５３⁃２４６８（２０１８）０１⁃２０１⁃０７　 　 　 中图分类号：Ｑ８９，Ｘ７０３．１　 　 　 文献标识码：Ａ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｈｕｍｉｃ ａｃｉｄ ｉｎ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｓｌｕｄｇｅ ｏｎ ｒｅａｌ⁃ｔｉｍｅ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ 学 ＰＣＲ　 １，２ １，２ １，２ １，２ １，２，∗ ＮＩ Ｍｉｎ ，ＬＩＵ Ｔｉｎｇｔｉｎｇ ，ＧＵ Ｈａｉｄｏｎｇ ，ＬＩ Ｘｉａｎｇ ，ＰＡＮ Ｙａｎｇ １． Ｊｉａｎｇｓｕ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｓｕｚｈｏｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃ