激光共聚焦显微镜样品制备方法组织切片样品.pdfVIP

29 4 电 子 显 微 学 报 Vol. 29 ，No. 4 第 卷第 期 2010 8 2010-08 年 月 Journal of Chinese Electron Microscopy Society 文章编号:1000-6281 (2010)04-0399-04 ( ) 激光共聚焦显微镜样品制备方法 二 ——— 组织切片样品 边 玮 ( ， 200031) 中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所 上海 : 。 摘 要 应用激光共聚焦显微镜技术对荧光标记的组织切片样品进行三维观察成像是生物学研究的常规手段 本文主要介绍实验室制备用于激光共聚焦显微镜成像的冷冻组织切片及免疫荧光标记过程。 : ; ; 关键词 冷冻组织切片 免疫荧光 激光共聚焦显微镜成像 中图分类号:Q336 ;TG115. 21 + 5. 3 文献标识码:A 应用于激光共聚焦显微镜的组织切片样品多 定容至100 mL ，过滤后分装成每管4 mL 或8 mL ， ， － 20 ℃ 。 80 ℃ 采用冷冻组织切片 可尽量保持组织样品的抗原活 保存于 使用前将储液置于 水浴中融 。 ， 、 、 、 ， 0. 0 1 mol / L PBS 4 % ， 。 (4 % 性 组织采集后 经固定 冷冻包埋 冷冻切片 晾 化 用 稀释至 即可使用 ， 。 PFA 4 ℃ ，24 h 片 进行免疫荧光抗体标记 工作液配好后可以 密闭保存 内 使用。) 1 、 组织的采集 固定和保存 2 组织的冷冻包埋和切片 不同来源的组织可依据实验条件和实验目的 而采用不同的固定和保存方法。实验室通常采用 组织的冷冻方法可根据固定和保存条件不同 液氮冷冻法和多聚甲醛(PFA) 。 ， 固定法 而不同 尽可能加快冷冻速度以力求减少组织在冷 ［1］ : ， 。 ， 液氮冷冻法 采取新鲜组织后 即可放入液氮 冻过程中冰晶的形成 组织冷冻后 使用冷冻切 。 ， 5 ～ 15 m ， 中保存