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生化报告单看血糖
实验:Folin-Wu法定量测定血糖的含量 一、实验原理 Cu2+(CuSO4)+葡萄糖Cu+(Cu2O) Cu2O+酸性钼酸试剂蓝色钼化合物OD420比色 无蛋白血滤液中的葡萄糖和碱性硫酸铜溶液共热反应,Cu2+即被葡萄糖还原成Cu+,Cu2O又把酸性钼酸试剂还原成低价的蓝色钼化合物—钼蓝。 血滤液中葡萄糖的含量与产生的Cu2O成正比,而Cu2O的量与产生的钼化合物的量成正比。可用比色法定量的测定。 二、实验仪器 1、新鲜兔子血2、滤纸3、血糖管4、奥氏吸管5、锥形瓶6、漏斗7、电炉8、水浴锅9、7200型可见分光光度计 三、实验试剂 1、标准葡萄糖溶液 (1)1%葡萄糖母液:称取葡萄糖,溶于蒸馏水,稀释并定容至100ml。 (2)葡萄糖标准液:取葡萄糖母液于100ml容量瓶中,加蒸馏水定容。2、10%钨酸钠溶液:称取钨酸钠10g,溶于蒸馏水并定容至100毫升。 3、/LH2SO4溶液:于53ml蒸馏水中加入1ml的浓硫酸。 4、碱性硫酸铜溶液 A液:无水碳酸钠35g,酒石酸钠13g及碳酸氢钠11g溶于蒸馏水,稀释定容至液:硫酸铜晶体5g,溶于蒸馏水并定容至100ml。 临用时,A液:B液=15:1混合,混合液于冰箱中保存。 5、酸性钼酸盐溶液: 称取钼酸钠600g,用少量蒸馏水溶解后倾入XXml的容量瓶中,加蒸馏水至刻度,摇匀,倾入另一较大的试剂瓶中,加溴水,摇匀,静止数小时后取上清夜500ml,于1000ml容量瓶中,徐徐加入225ml85%磷酸,边加边摇匀,再加25%硫酸150ml。置暗处次日,用空气将剩余的溴赶去。然后加99%醋酸75ml,摇匀,用蒸馏水稀释定容至1000ml,贮于棕色瓶中。 四、实验步骤 ?取25ml的血糖管(见图1)3支,编号。第一支血糖管中加入1ml蒸馏水; 第二支血糖管中加1ml标准葡萄糖液;用奥氏吸管吸取无蛋白血滤液1ml,放入第三支血糖管中。 ?然后向三支血糖管中各加入2ml新配制的碱性硫酸铜溶液,同时置于沸水浴中8分 钟,取出,在流水中迅速冷却后各加4ml酸性钼酸盐溶液。一分钟后,用蒸馏水稀释至25ml,混匀,用7220分光光度计在420波长处比色,以空白管调节零点。 五、结果计算 m=A1/A0×C0÷×100 式中:m=100ml全血中含血糖毫克数;C0=标准液葡萄糖含量A1=样品液光吸收值;A0=标准液光吸收值 :1ml无蛋白血溶液相对于全血 则100ml全血中所含血糖的含量:m=/×/ml÷×100ml= 六、实验分析 1实验过程中那些操作可能影响实验结果的准确性? 答:移取血液时;加硫酸、钨酸钠时;滤纸过滤时;蒸馏水稀释时 2实验中,血糖管有什么作用? 答:血糖管下部分管径较细,以避免还原生成的氧化亚铜被空气中的氧再氧化,降低实际结果 3实验过程中,为什么要用流水冷却加入碱性硫酸铜液反应后的血糖管? 答:因为用流水冷却加入碱性硫酸铜液反应后的血糖管可以让血糖管里的溶液尽快地稳定下来,防止里面的溶液出现凝固 注意事项 1.加硫酸、钨酸钠时,要边加边摇匀 2.沉淀由鲜红变为暗棕色,是因钨酸钠与硫酸生成钨酸,在适当酸度时,使血红蛋白变性沉淀,如果沉淀不变暗棕色或重新过滤后仍混浊,是因为血液中所加抗凝剂过多,可以加入10%硫酸1-2滴,待暗棕色后再过滤。 3.用定量滤纸过滤后应该得到完全澄清无色之无蛋白血滤液。如果得到仍带有红色的血滤液则说明蛋白质未被完全去除。 如何审核生化检验报告 生化检验报告的审核,是对生化检验结果质量的最后一次把关,工作意义重大。审核工作的好坏,主要决定于以下几个因素: 一、能够熟练的分析室内质控结果。 二、对检验项目所用检验方法学有深入的了解。 三、对所用仪器的性能和工作原理要熟悉掌握。 四、要有扎实的医学基础,由其是《实验诊断学》知识。 五、对实验前质量控制的掌握也非常重要。 下面对以上几点在生化报告审核过程上的应用进行具体的说明。 一、生化报告审核人员必须对当天室内质控结果熟知,并且进行过具体的分析。 要保证所有质控结果都在控的情况下,才可进行报告的审核工作。对于在控的项目,要了解该项目的质控值相对于靶值是偏高还是偏低,对于哪些接近2SD警告线的项目,更要重点观注。 例如:球蛋白项目结果一般是采用总蛋白值减去白蛋白值计算得出。也就是说球蛋白的结果受总蛋白和白蛋白两个因素的影响,假如当天总蛋白结果在控但偏高,而白蛋白结果在控却偏低,这样球蛋白的结果误差就是总蛋白和白蛋白误差的总和,很可能出现球蛋白结果增高,白球比值倒置现象。在审核过程中应
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