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牛生长曲线的绘制实验报告 　　一、实验方案设计　　二、实验报告　　三.实验总结　　实验五微生物生长量的测定及生长曲线的绘制　　一、实验目的　　?学习了解微生物生长量测定的方法　　?学习了解细菌生长曲线的绘制方法　　?学习掌握血细胞计数板的使用方法　　微生物生长量的测定　　?计数法重量法生理指标法　　1、显微镜直接计数法　　?利用血细胞计数板计数　　?　　?涂片计数　　2、活菌菌落计数法　　3、滤膜法　　细菌生长曲线　　将单细胞细菌接种到恒定容积的液体培养基中，不补充营养物或移去培养物，细菌以二分裂方式繁殖，以时间为横坐标，细菌数目的对数值为纵坐标，可画出一条反映细菌在整个培养期间菌数变化规律的曲线，称为生长曲线　　实验内容：计数法测定细胞生长曲线　　实验目的：学习细胞计数的方法；熟悉测定生长曲线的基本原理、方法，了解其　　应用。实验原理：一般细胞传代之后，经过短暂的悬浮后贴壁，随后度过长短不一的潜　　伏期，即进入大量分裂的指数生长期，在达到饱和密度后，细胞停止生长，进入平顶期，然后退化衰老。典型的生长曲线即可分为潜伏期、指数生长期、平顶期及退化衰老四个部分，其中的三个不同生长时相是每个细胞系所共有的特征。通过测定生长曲线，不仅可以了解培养细胞生物学特性的基本参数、测定细胞绝对生长数、判断细胞活力，而且也可用于测定药物等外来因素对细胞生长的影响。本实验采用计数法测定细胞生长曲线，通过连续对细胞计数，然后以存活细胞数对培养时间作图，即得该种细胞的生长曲线。　　仪器、材料和试剂：　　1、仪器：CO2培养箱、超净工作台、倒置显微镜、血球计数板　　2、材料：培养瓶、试管、吸管、移液管、废液缸、HeLa细胞、盖玻片、酒精灯3、试剂：培养基、%胰蛋白酶　　实验步骤：　　1、细胞悬液制备：取生长良好接近汇合的HeLa细胞，胰酶消化，再加新鲜培养基制成细胞悬液后计数。　　2、接种：根据细胞计数结果，按每瓶5×104个接种细胞作传代培养。　　3、计数：24h后开始作细胞计数，以后每隔24h计数一次，连续计数7天。4、绘图：根据计数结果，绘制HeLa细胞生长曲线。结果与讨论：　　1、细胞计数结果如下：　　1　　2、绘制生长曲线如下：　　HeLa细胞生长曲线　　120　　100　　细胞数　　80　　6040　　200　　123　　4　　5　　6　　7　　天数　　3、分析与讨论　　由上图可以看出，实际所得生长曲线与理论生长曲线有一定差距，主要表现在潜伏期和倍增时间不明显。这可能是由于计数误差造成的。　　⑴、理论上应该每人接种21瓶细胞，每天取3瓶计数，但实际每人只接种8瓶，每天仅计数一瓶细胞，无平行样品取平均值来消除误差。⑵、每瓶细胞也没有重复计数2-3次。　　⑶、未做染色，有时死活细胞区分不清，可能导致计数不准。　　⑷、由于操作不熟练，胰酶消化时间控制不当也能导致细胞计数误差。　　2