绿色植物色素的提取实验报告.docx

绿色植物色素的提取实验报告 　　绿色植物中色素的提取和分离　　[实验名称]绿色植物色素的提取及色谱分离　　[教学目标]知识与技能:通过对绿色植物色素的提取与分离，了解天然产物分离提纯的方法　　[教学重点]学习柱色谱和薄层色谱分离的基本原理及操作方法　　[教学难点]薄层色谱、柱层析实验操作要点的掌握和应用　　[教学方法]陈述法，讲演法　　[教学过程]　　[讲述]【实验目的】　　1.通过绿色植物色素的提取和分离，了解天然物质分离提纯方法；　　2.通过对柱色谱和薄层色谱操作方法的掌握，加深了解微量有机物色谱分离、鉴定的原理。　　[讲述]【背景知识】　　绿色植物的叶、茎中，如菠菜叶，含有叶绿素、胡萝卜素和叶黄素等多种天然色素。叶绿素存在两种结构相似的形式即叶绿素a(C55H72O5N4Mg)和叶绿素b(C55H70O6N4Mg)，其差别仅是叶绿素a中一个甲基被甲酰基所取代从而形成了叶绿素b。它们都是吡咯衍生物与金属镁的络合物，是植物进行光合作用所必需的催化剂。植物中叶绿素a的含量通常是b的3倍。尽管叶绿素分子中含有一些极性基团，但大的烃基结构使它易溶于醚、石油醚等一些非极性的溶剂。胡萝卜素是具有长链结构的共轭多烯。它有三种异构体，即a-胡萝卜素、β-胡萝卜素和γ-胡萝卜素，其中β-胡萝卜素含量最多，也最重要。叶黄素是胡萝卜素的羟基衍生物，它在绿叶中的含量通常是胡萝卜素的两倍。与胡萝卜素相比，叶黄素较易溶于醇而在石油醚中溶解度较小。　　本实验先根据各种植物色素的溶解度情况将胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a和叶绿素b从菠菜叶中提取出来，然后根据各化合物物理性质的不同用色谱法进行分离和鉴定。　　[图示]【分离产物结构式】　　叶绿素a、叶绿素b、叶黄素和β-胡萝卜素的结构式如下图所示：　　[讲述]【色谱法原理】　　色谱法是分离、提纯和鉴定有机化合物的重要方法。其分离原理是利用混合物中各个成分的物理化学性质的差别，当选择某一个条件使各个成分流过支持剂或吸附剂时，各成分可由于其物理性质的不同而得到分　　离。与经典的分离提纯手段相比，色谱法具有微量、快速、简便和高效等优点。按其操作不同，色谱可分为薄层色谱、柱色谱、纸色谱、气相色谱和高压液相色谱等。在此，我们学习柱色谱和薄层色谱。　　1.柱色谱原理　　液体样品从柱顶加入，流经吸附柱时，即被吸附在柱中固定相的上端，然后从柱顶加入流动相淋洗，由于固定相对各组分吸附能力不同，以不同速度沿柱下移，吸附能力弱的组分随洗脱剂首先流出，吸附能力强的组分后流出，分段接收，以此达到分离、提纯的目的。　　2.薄层色谱原理　　由于混合物中的各个组分对吸附剂的吸附能力不同，当展开剂流经吸附剂时，发生无数次吸附和解吸过程，吸附力弱的组分随流动相迅速向前移动，吸附力强的组分滞留在后，由于各组分具有不同的移动速率，最终得以在固定相薄层上分离。其应用主要有：跟踪反应进程；鉴定少量有机混合物的组成；分离；寻找柱色谱的最佳分离条件等。　　[提问]试比较叶绿素、叶黄素和胡萝卜素三种色素的极性，为什么胡萝卜素在层析柱中移动最快？　　[讲述]【实验试剂】　　新鲜菠菜3g、石油醚、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、硅胶G、中性氧化铝　　[讲述和演示]【实验步骤】　　1.菠菜色素的提取过程　　取3g新鲜菠菜叶于研钵中拌匀研磨5分钟，残渣用20mL的石油醚-乙醇混合液进行提取，共提取两次。把浸取液合并过滤，滤液转移到分液漏斗中，加入等体积的水洗涤后弃去下层的水-乙醇层，石油醚层再用等体积的水洗涤两次，以除去乙醇和其它水溶性物质。石油醚层用无水Na2SO4进行干燥、浓缩为2mL。取一半做柱层析分离，其余留作薄层层析分析。　　2.柱色谱的一般过程及菠菜色素的分离：　　【柱色谱的一般过程】　　选择吸附剂：　　常用的吸附剂：氧化铝，硅胶，氧化镁，碳酸钙，活性炭等　　选择规则：吸附剂必须与被吸附物质和展开剂无化学作用；吸附剂的颗粒大小要适中；可以根据被提纯物质的酸、碱性选择合适的吸附剂。　　化合物的吸附能力与分子极性的关系：分子极性越强其吸附能力也较强。极性基团的吸附能力排序如下：　　Cl-,Br-,I-A、仪器和药品　　玻璃片,展缸，毛细管，分液漏斗，锥形瓶，底烧瓶，玻璃棒，色谱柱，分液漏斗，烧杯，量筒，减压抽滤机，UV-240紫外分光光度计　　新鲜菠菜，硅胶G，羧甲基纤维素钠，乙醇，石油醚，乙酸乙酯，无水硫酸钠圆　　B、实验步骤　　1.薄层色谱板的制备　　制备薄层载片　　如是新的玻璃板，切割成150*30*或100*30*的载玻片，水洗，干燥。如果重新使用的载玻片，要用洗衣粉和水系，用水淋洗，用50%甲醇溶液淋洗，让片完全干燥。取用时应让手指接触片的边缘，因为指印沾污片的表面上将使吸附