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紫外吸收光度法鉴别和测定维生素b12注射液实验报告数据分析 　　紫外吸收光度法鉴别和测定维生素B12注射液　　【实验内容】　　1.对照品溶液和样品溶液的配制　　准确称取维生素B12对照品适量，加水溶解稀释成25μg/mL的溶液。　　精密吸取维生素B12注射液ml于10ml容量瓶中，用水稀释至刻度摇匀，得到待测　　样品溶液。　　2.吸收光谱的绘制与注射液的鉴别　　取对照品溶液进行光谱扫描，得到维生素B12的吸收曲线，寻找吸收峰，　　扫描后可得到在278nm，361nm和550nm波长处出现的3个吸收峰，然后在以上3个吸　　收峰处测量维生素B12注射液的吸光度，并计算A361/A278和A361/A550的比值。　　3.维生素B12的定量测定　　根据吸收曲线选择最大吸收波长作为测量波长，测量维生素B12　　【注意事项】　　1.注意石英比色皿的操作使用；　　峰位置波长略有差异。这是因为不同的仪器由于其性能的差异，导致吸光度和波长等参数不同，因此必须对仪器进行定期的校正。　　3．比较用吸光系数和校正曲线定量方法，你认为哪种方法好？为什么？　　吸光系数法可根据测量得到的吸光度直接计算浓度，简便易行，但仪器性能差异会导致结果误差较大，因此必须对仪器的吸光度和波长进行校正后方能采用此法，且浓度要在复合Beer定律的线性范围内。校正曲线法是配制一系列标准溶液作为基础进行测量，即使有偏离Beer定律线性关系，也可以应用于测定。因为是在相同条件下测量，有标准溶液的校正，可抵消仪器性能、操作等所带来的系统误差，与前一种方法相比，虽然操作步骤要繁琐些，但准确、可靠，是测定最常用的方法。　　紫外分光光度法测定维生素C片维生素C的含量　　一、实验目的　　1.学习利用紫外吸收光谱测定物质含量的原理和方法；2.熟练紫外-可见分光光度计的操作。　　二、实验原理　　维生素C是一种酸性己糖衍生物，具有烯醇式己糖内酯立体结构，分D和L两种立体构型，但只有L型有生理功效。维生素C具有较强的还原性,在一定条件下氧化型和还原型可以互变,两者均具有生物活性(结构式见图1),其C2和C3位上两个相邻的烯醇式羟基极易解离而释放出H+,故维生素C虽然不含自由羧基，仍具有有机酸的性质。维生素C呈无色无臭的片状结晶体,易溶于水,不溶于脂。在酸性环境中稳定,遇空气中氧、热、光、碱性物质,特别是有氧化酶及痕量铜、铁等金属离子存在时可促进其破坏速度。　　具有π电子的共轭双键化合物、芳香烃化合物等，在紫外光谱区都有强烈吸收，其摩尔吸收系数k可达104-106数量级。利用紫外吸收光谱进行定量分析，要借助朗伯-比尔定律。根据维生素C在稀硫酸溶液中，在245nm波长处有最大吸收的特性，建立了紫外分光光度法测定维生素C片含量的方法。　　三、实验仪器及试剂　　实验仪器：容量瓶、移液管、烧杯、紫外　　分光光度计　　实验用品：98%浓硫酸、维生素C对照品系以原料药经105℃　　干(来自:写论文网:紫外吸收光度法鉴别和测定维生素b12注射液实验报告数据分析)燥至恒重、维生素C片、去离子水　　四、实验步骤　　1.mol·L-1硫酸溶液的配制　　用ml移液管移取ml98%浓硫酸放入事先已盛有蒸馏水的烧杯中，搅拌，冷却至室温后移入1000ml容量瓶，稀释至刻度，待用。2.g·L-1对照品溶液的配制　　精密称取105℃干燥至恒重的维生素C对照品50mg置100ml量瓶中，加mol·L-1硫酸溶液制成g·L-1对照品溶液。3.维生素C对照品标准溶液的配制　　用5ml移液管精密量取g·L-1对照品溶液、、、、ml，分别置100ml量瓶中，用mol·L-1硫酸溶液稀释至刻度，摇匀，待用。4.测定波长及标准曲线　　以mol·L-1硫酸溶液为空白，测定维生素C在稀硫酸溶液中最大吸收波长，并在此波长处测定维生素C对照品标准溶液的吸光度，以浓度对吸光度作线性回归。5.样品含量测定　　取维生素C片2片，精密称定，研细，精密称取适量置100ml容量瓶中，加mol·L-1硫酸溶液适量，超声5min使溶解，再加mol·L-1硫酸溶液至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液ml置100ml量瓶中，加mol·L-1硫酸溶液至刻度，摇匀，在最大吸收波长处测定吸光度。6.空白试验　　模拟维生素C片处方比例，精密称取辅料适量置100ml量瓶中，与步骤5样品含量测定同法操作，在最大吸收波长处测定吸收度为0。7.回收率试验　　先测得2ml样品溶液的吸光度A1，再取g/L的VC标液200μl，于2ml已测得吸光度A1的样品溶液中，再测得吸光度A2。　　五、实验数据记录及处理　　1.维生素的吸收波长　　在紫外可见分光光度计上扫描测定VC标准样品的吸收光谱，结果显示VC