解淀粉芽孢杆菌高效合成胞苷的代谢调控机制及育种策略.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１５，３５（９）：１２２１２７ ＤＯＩ：１０．１３５２３／ｊ．ｃｂ 解淀粉芽孢杆菌高效合成胞苷的代谢 调控机制及育种策略  吴　庆　刘慧燕　方海田 　何建国　贺晓光　于丽男　王梦娇 （宁夏大学农学院　银川　７５００２１） 摘要　胞苷是合成抗病毒、抗肿瘤药物的良好中间体，也是核苷酸类保健食品和功能性食品的重 要原料。主要论述了解淀粉芽孢杆菌高效合成胞苷的代谢调控机制和构建胞苷高产菌株的育种 策略。重点阐述了通过提高解淀粉芽孢杆菌嘧啶操纵子转录水平，增强胞苷合成代谢途径、阻断 胞苷降解途径、增大磷酸戊糖途径向胞苷合成途径的分流量、提高胞苷合成前端代谢物ＰＲＰＰ的 合成量、增强中心碳代谢流向胞苷合成途径、减少旁路代谢途径及促进胞苷的分泌等方法，选育 出胞苷高产菌株，不仅为胞苷高产菌株的选育提供参考，也为解决目前胞苷工业化生产中存在的 问题提供思路。 关键词　解淀粉芽孢杆菌　胞苷　代谢调控机制　育种策略 中图分类号　Ｑ８１９ ［４］ 　　嘧啶核苷包括胞嘧啶核苷和尿嘧啶核苷。胞苷作 很强的天然磷酸单酯酶活力 ，而解淀粉芽孢杆菌（Ｂ． 为嘧啶核苷，具有多方面生理活性，尤其在生物体内生 ａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ）具备这一特性，并且解淀粉芽孢杆菌 理生化过程中起着重要的调控作用。胞苷不仅是很多 全基因组测序已经完成，遗传背景清晰，嘧啶代谢通量 抗病毒、抗肿瘤和抗艾滋病药物的良好中间体，也是基 ［５］ 大，适合作为胞苷生产的出发菌株 。 因工程研究的重要原材料。胞苷具有非常广泛的应用 　　本文主要以解淀粉芽孢杆菌作为出发菌株进行研 前景，胞苷的产量需求也逐年递增。胞苷生产方法主 究，分析了该菌的胞苷合成代谢调控机制，提出构建胞 ［１２］ ? 要有ＲＮＡ化学合成和微生物发酵 。化学合成法是 苷高产菌株的育种策略，为大规模、单一地发酵生产胞 目前国内外制备胞苷的主要方法，即以胞嘧啶和核糖 苷，降低其生产成本，加快其工业化进程提供参考。 或者以尿苷为主要原料制备胞苷，但化学合成法存在 １　国内外胞苷生产菌种选育的研究进展 许多问题，如反应条件苛刻、反应步骤多、环境污染大 及原料成本高等。微生物发酵法生产胞苷具有成本 　　嘧啶核苷主要用于药物中间体，对于嘧啶核苷高 ［６］ 低、条件简单、产率高、周期短等优势，已逐渐成为生产 产菌选育的研究报道比嘌呤核苷要晚 。从２０世纪 胞苷的研究热点［３］。目前国内尚无胞苷生产企业，仍 ９０年代中期开始，随着嘧啶核苷的需求量不断加大，对 需从国外进口，而国外胞苷发酵已达到工业化水平。 胞苷代谢的研究也逐渐深入，发酵法生产胞苷得到广 因此，急需找出一种高效生产胞苷的方法，以期解决我 泛的重视，国内外围绕着嘧啶生物合成的代谢调控机 国胞苷发酵中存在的问题，不断提高胞苷发酵水平。 制和核苷产生菌的遗传改造等方面开展了广泛的研 据报道，微生物发酵法生产嘧啶核苷的菌株与生产嘌 究，胞苷代谢的研究逐渐成为国内外研究的热点。 呤核苷的菌