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华中农业大学 生物质与生物能源研究中心 实验操作手册 2018 年6 月制 编者名单 主编：黄江锋 李丰成 编委：范春芬 李 英 胡慧贞 李 傲 孙 丹 汪 洋 胡 振 徐成宝 王金彤 张 冉 张贵粉 朱晓博 吴雷明 杨巧梅 刘 鹏 靳晓焕 李先良 吕政熠 责编：王艳婷 涂媛苑 2018 年6 月第1 次编印 华中农业大学生物质与生物能源研究中心实验操作手册 目 录 分子克隆 1 DNA 提取 1 RNA 提取 2 基因表达分析 5 载体构建（常规） 6 Gateway 系列载体构建 12 单位点CRISPR 载体构建 13 多位点CRISPR 载体构建 15 农杆菌操作 18 转基因操作 20 水稻转基因 20 拟南芥转基因 23 洋葱表皮细胞瞬时转化 23 分子标记 25 蛋白、生化分析 27 蛋白质原核表达 27 抗体制备与纯化 28 Brandford 法测定蛋白浓度 29 膜蛋白提取与分离 30 免疫共沉淀（CO-IP ） 30 SDS 31 Western blot 32 纤维素体外合成 33 纤维素酶活性测定 34 β-葡萄糖苷水解酶活性测定 35 酵母双杂交 35 染色质免疫共沉淀（ChIP ） 38 细胞学实验 42 I 华中农业大学生物质与生物能源研究中心实验操作手册 琼脂糖包埋震动切片 42 石蜡包埋半薄切片 42 树脂包埋超薄切片 43 叶片细胞形态学观察 43 纤维素染色观察 44 木质素染色观察 44 多糖抗体免疫荧光观察 44 多糖量子点免疫荧光观察 45 拟南芥种子果胶质免疫荧光观察 46 胼胝质测定与观察 46 GUS 染色观察 47 水稻原生质体分离与激光共聚焦观察 47 扫描电镜观察 48 透射电镜观察 49 原子力显微镜观察 49 水稻农艺性状分析 51 机械力学性状考察 51 水稻考种 51 稻米品质测定 52 淀粉含量测定 53 光合速率测定 55 稻瘟病抗性分析 55 白叶枯病抗性鉴定 56 褐飞虱抗性鉴定 56 植物细胞壁成分分析 58 细胞壁多糖提取 58 比色法测戊糖、己糖和糖醛酸 60 硅含量测定 61 提取粗纤维素 62 II 华中农业大学生物质与生物能源研究中心实验操作手册 纤维素聚合度测定 62 纤维素还原端分析 64 纤维素结晶度测定 64 木质素总量测定 64 木质素单体分析 65 键连接分析 67 乙酰化分析单糖含量 67 硅烷化分析 69 甲基化分析 70 2-AB 衍生化分析 70