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芦丁精制实验报告 　　实验一、槐米中芦丁的提取、精制和鉴定　　实验目的要求　　1.制备芦丁，供药用。　　2.通过芦丁的制备，掌握黄酮类化合物的提取分离的原理和操作。3.熟悉重结晶技巧。　　4.了解和掌握黄酮类化合物的一些主要性质和鉴定方法。　　实验的基本原理　　1.芦丁的提取原理　　利用芦丁结构中含有多个酚羟基，呈酚酸性，能在碱水中溶解的性质，可用碱性溶剂进行提取，提取液加酸后可沉淀析出。也可利用芦丁在冷水中溶解度小，在热水中溶解度大的性质进行提取。　　2.芦丁的分离原理　　利用芦丁结构在冷乙醇中溶解度小，在热乙醇中溶解度大，以及在热水中溶解度大，在冷水中溶解度小的性质分离。芦丁用溶剂加热溶解后，趁热抽滤，滤液放冷后能析出而达到分离的目的。也可采用醇溶水沉法进行精制。3.芦丁的鉴定原理　　利用吸附薄层色谱的分离原理，芦丁与芦丁对照品在同一条件下进行展开，显色，以达到鉴定芦丁的目的。　　通过专属的化学显色反应，确定芦丁的成分类型。　　(三)实验内容　　1.用碱提法、水提法、醇提法提取槐米中芦丁。2.用酸沉法和冷却过饱和法分离芦丁。3.溶剂重结晶精制芦丁。　　4.薄层色谱法和显色反应鉴定芦丁　　(四)实验药材仪器与试剂　　1.实验药材槐米20g。　　2.仪器：磁力加热搅拌器、旋转蒸发仪、粉碎机、500ml烧杯，1000ml烧杯，50ml烧杯，250ml园底烧瓶、500ml园底烧瓶、100ml量筒、50ml量筒、100ml锥形瓶、50ml锥形瓶、研钵、移液管、减压过滤装置，布氏漏斗，抽滤瓶、层析缸等。　　3.试剂：硼砂、氧化钙、HCI、三氯化铝、甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、甲酸、滤纸、PH试纸等。实验步骤　　1.提取　　称取槐米粗粉20g，在研钵中研碎后放入500ml烧瓶中，加水200ml，用磁力加热搅拌器加热煮沸30min，趁热过滤。残渣同法操作一次，合并两次滤液，放置冰箱中析晶，待全部析出后，减压抽滤，用少量蒸馏水洗涤芦丁结晶，抽干，得粗制芦丁，干燥，称重，计算得率。　　2.精制　　取粗制芦丁1g，置于250ml园底烧瓶中，加80%乙醇30ml加热回流15分钟，趁热抽滤。滤液置250ml烧杯中，向滤液中加蒸馏水至溶液呈明显混浊，室温放置，抽滤得精致芦丁。用少量蒸馏水洗涤芦丁结晶，晾干，称重。　　(六)过程与现象记录　　Day1　　1.提取　　①称取研碎的粗槐米，组装仪器。　　②原料放入500mL烧瓶中加水200mL，磁力搅拌加热。烧瓶中为咖啡色悬浮液，有甘苦气味，沸腾前不断产生小气泡上，液体中有明显漩涡。102℃沸腾，产生大量气泡，药渣翻滚，漩涡被气泡遮盖。加热过程中时常停止沸腾，续略升温2~3℃。随着时间的延长，液体颜色加深。煮沸觃程中应控制液量，过少难以提出药品，过多容易喷出瓶口。　　③最初用抽滤法分离残渣，但是溶液很稠且含糖分较多，难以流下，并且易阻塞和冲破滤纸，还渐渐冷却。后改用离心法，5000r,15min(1-7)，效果略好，但是溶液还是冷却，溶解的提取物较少。滤液为深黄色色，粘稠，气味浓厚甘甜。　　④再次将滤渣至于放入500mL烧瓶中加水200mL磁力搅拌加热30min，液体颜色略比第一次深。⑤将两次得到的浸液收集放入冰箱备用。　　Day2　　2．精制　　1.将粗提物抽滤，干燥得粗制芦丁。　　2.取粗制芦丁，置于250ml园底烧瓶中，加80%乙醇30ml，加热回流15分钟，加热前没有充分分散固体粗提物，趁热抽滤，得到黄色油状液体。　　2.另旋转蒸发粗提物的滤液，没有产物。　　Day3　　3.鉴定　　点滴显色反应从放置一周的粗提物中取芦丁的甲醇溶液分别点在滤纸上，挥去溶　　剂，紫外照射，光吸收明显，然后分别添加供试液芦丁的甲醇溶液和显色剂2%三氯化铝乙醇溶液，显黄色，在紫外灯下λ365nm观察有明显亮斑。　　薄层色谱鉴定　　吸附剂：硅胶GF254薄层板。样品：自制芦丁对照品：芦丁对照品的甲醇溶液。展开剂：三氯甲烷-甲醇-甲酸　　显色：a.先在可见光下观察，然后在紫外光下观察，有明显紫外吸收。　　b.遮挡硅胶板左侧喷三氯化铝试剂，365nm紫外灯下观察，右侧有显色剂呈　　黄色，左侧有明显紫外吸收。　　4.注意事项　　(1)硼砂因能与芦丁中的邻二酚羟基结合，起保护邻二酚羟基，不被氧化破坏的作用。实验证明，提取时加入硼砂，产品的质量会好些。　　(2)石灰乳既能达到碱溶解提取芦丁的目的，还可以除去槐米中大量的粘液质和酸性树脂，但PH不能过高和长时间煮沸，因为会导致芦丁的水解而开环和形成钙鳌合物，影响产品的质量和产率。　　(3)PH过低会使芦丁形成洋盐而收率降低。　　(4)称量芦丁时，先将带滤纸的漏斗称重，再将盛样品的带滤纸的漏斗