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细胞生长曲线的绘制实验报告 　　实验五微生物生长量的测定及生长曲线的绘制　　一、实验目的　　?学习了解微生物生长量测定的方法　　?学习了解细菌生长曲线的绘制方法　　?学习掌握血细胞计数板的使用方法　　微生物生长量的测定　　?计数法重量法生理指标法　　1、显微镜直接计数法　　?利用血细胞计数板计数　　?　　?涂片计数　　2、活菌菌落计数法　　3、滤膜法　　细菌生长曲线　　将单细胞细菌接种到恒定容积的液体培养基中，不补充营养物或移去培养物，细菌以二分裂方式繁殖，以时间为横坐标，细菌数目的对数值为纵坐标，可画出一条反映细菌在整个培养期间菌数变化规律的曲线，称为生长曲线　　细胞生长曲线的测定　　一、实验目的　　掌握测定细胞生长曲线的方法。　　二、实验器具　　24孔细胞培养板、微量加样器、eppendorf管、吸头、吸头盒、显微镜、细胞计数板、载玻片、盖玻片、吸管、试管架、普通显微镜、细胞悬液、%台盼蓝。　　三、实验方法　　1.培养细胞：首先在24孔细胞培养板内分别接种相同数量的细胞，计数并记录接种的细胞悬液密度，接种时间记为0小时。　　2.计数细胞密度：从接种时间算起，每隔24小时计数3孔的细胞密度，算出平均值。为提高准确率，对每孔细胞可计数2-3次，如此操作至第七天结束。　　3.绘制曲线：以培养时间为横坐标、细胞密度为纵坐标，将全部结果在坐标纸上绘图，即得所培养细胞的生长曲线。　　MTT实验　　实验材料：　　1，5%FBS-L-DMEM,5x104个/ml细胞悬液，5mg/mlMTT溶液，DMSO,PBS,2,96孔板共7个,酶标仪,50ml离心管，离心管，μm滤膜，锡箔纸，MTT工作液　　实验步骤：　　1，分别选取生长良好的P1、P3、P5代BMSCs消化后制备成细胞悬液，调整细胞密　　度为5x104/ml。接种到96孔板，每孔接种200μl细胞悬液进行培养。　　2，培养16-48后，每天选择6个培养孔各自加入MTT溶液20μl，37℃　　继续孵育。　　3，孵育4h后终止培养，吸出孔内上清，此时应该倾斜96孔板，用枪头小心的将上　　清液吸去，不可吸去下面的结晶颗粒，慢慢吸去。每孔加入150μlDMSO,室温振荡10min，使结晶充分溶解，于试验孔平行设不加细胞只加培养液的空白对照1孔。　　注意事项：　　【1】1,两种方法分离小型猪骨髓间充质干细胞的比较　　分别取两组0,1,3代细胞，制成1x103的细胞悬液，接种到96孔板，每孔细胞悬液200微升，置37℃、5%CO2饱和湿度孵箱内孵育，各组每24小时分别取出4孔，每孔加入MTT20微升37℃孵育，4h后吸弃孔内培养液，每孔加入150微升分析纯的二甲基亚砜，移至酶联免疫检测仪上振荡10min,用分光光度计在492nm波长处测定每孔的吸光度值，以OD(492)值为纵坐标，时间为横坐标绘制生长曲线　　【2】来自：SD大鼠骨髓间充质干细胞体外分离培养的实验研究　　大鼠MSCs生长曲线测定：为了定量测定大鼠BMSCs的生长状况，对来源于同一动物的原代细胞进行连续培养。分别选取生长良好的P1、P3、P5代BMSCs消化后制备成细胞悬液，调整细胞密度为5x104/ml。接种到96孔板，每孔接种200μl细胞悬液进行培养。次日起每天选择6个培养孔各自加入MTT溶液20μl，37℃继续孵育4h后终止培养，吸出孔内上清，每孔加入150μlDMSO,室温振荡10min，使结晶充分溶解，于试验孔平行设不加细胞只加培养液的空白对照1孔。在酶标仪上选择570nm波长，以空白孔调零，测定各孔吸光度值，连续测7天，以时间为横轴，A值为纵轴绘制细胞生长曲线。　　来自：XX人骨髓间充质干细胞的分离培养及部分生物学特性的实验研究　　来自：XX贴壁法培养大鼠的骨髓间充质干细胞