病毒的鸡胚培养法.pptVIP

病毒的鸡胚培养 （一）实验目的 （二）实验原理 （三）实验器材 （四）实验方法 （五）实验作业 （一）实验目的 1.了解鸡胚培养有哪几种常用的接种方法。 2.掌握鸡胚尿囊腔接种培养鸡新城疫病毒的操作技术。 （二）实验原理 实验室培养病毒常使用动物接种和鸡胚培养两种方法，而鸡胚培养更为常见。一般而言，禽病毒病大部分可经鸡胚分离病毒，其他动物病如犬瘟热也可经鸡胚分离病毒。 鸡胚接种技术是养禽业中一种相对新的疫苗接种方法。这种方法就是对孵化后期的鸡胚接种某些活的病毒疫苗。这些病毒疫苗不会对孵化率产生不利的影响，通过这种方式接种疫苗后孵出的雏鸡具有免疫保护力。 （三）实验器材 1.鸡胚：要选择SPF鸡胚或低母源抗体的鸡胚。从实践看，法氏囊炎病毒对抗体相当敏感，所以要用无母源抗体的鸡胚；而新城疫病毒、禽流感病毒等可抵御母源抗体的作用而得以繁殖致死鸡胚。 孵化前的鸡胚应注意消毒，置37-38℃、相对湿度45-60%的孵卵器中孵育，每日翻蛋数次，孵蛋第4天开始照蛋，弃去无精蛋和死胚。多采用9-11日龄的活胚接种。 （四）实验方法 1.接种前的准备： a.鸡胚的准备：选择9-11日龄的鸡胚，在照蛋时以记号笔勾出气室，于气室稍下方胚胎活跃而血管明显的区域中，在血管之间的间隙划上记号，作为接种部位。用3%碘酊对接种部位进行消毒，再用75%酒精棉球擦一遍，在接种定位处打孔，气室向上竖放于蛋托上。 b.病毒材料的准备：要分离培养的病毒材料应是无菌的，因此在处理材料的过程中，应严格按照无菌操作进行，将新城疫弱毒活疫苗按照每1000羽份配成250ml,为达到无菌的目的，可在每毫升接种物中加入青霉素和链霉素各100-5000IU，置室温中1h处理。 法氏囊病毒的分离 取疑似感染病毒的法氏囊，称重，按1:5（w/v）加入生理盐水，研磨，-20℃，反复冻融2次；每次冷冻时间以研磨物结冰为准； 将冻融物转入离心管中，3000转/分，离心5分钟，将上清取出，使用无菌滤器过滤 2.接种 鸡胚接种的方法有几种： 取10-12日龄的鸡胚，照蛋选择血管较少的部位做一记号，用磨蛋器磨一于纵轴平行的裂痕，小心挑开蛋壳，将白色的壳膜用针尖小心挑破，不要伤及血管丰富而透明的绒毛尿囊膜，在气室顶端钻一小孔，用滴管贴近小孔，轻轻一吸，绒毛尿囊膜便下陷成一小凹。 取10-12日龄的鸡胚，消毒气室顶上的蛋壳，并将气室顶端的蛋壳锉一三角形的裂痕，用灭菌镊子揭去裂痕部位的蛋壳和壳膜，用灭菌平头镊子刺破尿囊膜，并轻轻夹去羊膜，用小号针头刺进羊膜腔内，注入0.05-0.1ml的病毒接种液，以氧化锌胶布封口，滴上溶化的固体石蜡。放回孵化器，使蛋直立孵化。 选择6-8日龄的鸡胚，照蛋检查，划出气室和胎位，并以气室向上竖立在蛋托上，气室端的蛋壳经消毒后以打孔器钻一小孔，将注射针头刺过小孔，沿着卵的纵轴刺入约3cm，然后注入0.2ml的病毒接种液，用氧化锌胶布及石蜡封口后放回孵化器中培养。 4.废料处理 操作完毕，将所有的用具煮沸消毒，擦净后再以消毒水浸洗，卵壳、壳膜和胚胎等残物煮沸消毒后弃去。 （五）实验作业 1.用鸡胚培养病毒，在选用鸡胚时应注意什么问题？ 2.绒毛尿囊腔内接种在培养和收毒过程中应注意哪些问题？ * 鸡胚的模式结构 1.卵壳 2.绒毛尿囊膜 3.尿囊腔 4.羊水腔 5.卵黄囊 6.鸡胚胎 7.卵白 绒毛尿囊腔内接种 ★★ 绒毛尿囊膜接种 羊膜腔接种 卵黄囊内接种 绒毛尿囊膜接种 绒毛尿囊膜接种 1.鸡胚胎2.羊膜腔3.绒毛尿囊膜 羊膜腔接种 羊膜腔接种 1.鸡胚胎2.羊膜腔3.绒毛尿囊膜4.羊膜 卵黄囊内接种 卵黄囊接种 鸡胚的各种接种途径 1.绒毛尿囊膜接种 2.尿囊腔接种 3.羊水腔接种 4.卵黄囊接种 绒毛尿囊腔内接种 ★★ 绒毛尿囊膜接种 羊膜腔接种 卵黄囊内接种 3.收毒：病毒的收毒根据接种的途径而定。 尿 囊 液 绒毛尿囊膜 羊 水 卵黄液和卵黄膜 *