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中科森辉微球技术(苏州)有限公司 苏州工业园区金鸡湖大道99号纳米城NW-02幢 #713 邮编：215123 PAGE2 / NUMPAGES2 羧基活化偶联介质（ECH-activated QZT 4FF）产品说明书 1. 产品简介 羧基活化偶联介质可用于各种含有氨基的亲和配基（蛋白质、多肽、糖等）的偶联，广泛十分广泛。ECH-activated QZT 4FF活化偶联介质以自制的琼脂糖凝胶为基质，经过一系列的活化步骤，最终形成活化羧基，在温和的条件下就可以偶联各种带氨基的配基。EAH-activated QZT 4FF活化偶联介质具有使用方便、偶联条件温和、偶联效率高和应用范围广的特点。 2. 产品特性 羧基活化偶联介质的理化性质和产品特性如表1所示。 表1 羧基活化偶联介质的理化性质和产品特性 参数 指标 基质 4%交联琼脂糖凝胶 活化基团 羧基 形状 球形 介质平均粒径 90 μm (45-165) 活化基团密度 12-18 μmol /ml wet gel 偶联条件 pH 4.5, 4 oC–室温, 2-24h 最高流速（25℃ 450 cm/h 推荐流速 150 cm/h 最高耐压 0.3 MPa (3 bar) 保存 -20 oC（100%异丙醇） *：除4FF基质外，也可以提供4B、6FF和6B基质的羧基活化介质。 3. 应用 ECH-activated QZT 4FF活化偶联介质广泛用于各种含有氨基的亲和配基（蛋白质、多肽、糖等）的偶联。具体的操作步骤如下（以4ml活化胶偶联BSA为例）： （1）将约4 ml ECH活化胶水洗3-5次后抽干，再用稀HCl，pH 4.5溶液清洗2次，抽干后将4 ml ECH活化胶（约3.0 g）加入到10 ml的反应器（磨口三角瓶或离心管）中，备用。 （2）准确称取40 mg BSA溶于4.0 ml稀HCl, pH 4.5溶液，溶解完全后加入84 mg EDC.HCl，溶解完全后测量其pH是否为4.5，否则需调到4.5，备用。 （3）将BSA溶液加入到活化胶中，反应温度恒定在4℃或25℃，摇床中振荡混合（离心管水平放置），转速120 rpm，反应时间24 h（反应前1小时pH有明显的下降，可在15、30、45、60 min时测量pH并加入适量稀NaOH 调pH至4.5）。 （4）反应停止后，静置，取上清离心（3000 g，5 min，室温），收集上清液用于未偶联BSA的浓度分析，计算偶联的BSA的配基密度；将其余料液转移到砂芯漏斗中用去离子水清洗、抽干。 （5）封闭未反应的ECH：一般不需要封闭，如需封闭未反应的羧基，可在偶联反应后（注意是在清洗前）直接往反应物中加入4.2 ml 1 M 氨基葡萄糖或乙醇胺，继续反应4h。反应停止后将料液转移到砂芯漏斗中抽干，用去离子水清洗。 （6）清洗 将制得的BSA琼脂糖凝胶依次用5倍的去离子水、0.1 M 含0.5 M NaCl的乙酸-乙酸钠缓冲液（pH 4.0）、去离子水、0.1M 含0.5 M NaCl的硼酸-四硼酸钠缓冲液（pH 8.0）和去离子水充分洗涤（重复清洗3次），抽干，去除未反应的配基。 （7）保存 制得的BSA亲和介质保存于4℃、20%乙醇溶液中。 备注：其他配基的偶联方法与BSA类似，但反应条件（温度（4 oC至室温）、时间（4-24 h）、配基加入量）需要根据配基的特性和应用的需求进行适当调整。 注意事项：通常用稀盐酸作为偶联溶液，如果选用缓冲液要避免使用含有氨基、羧基、磷酸基的缓冲液。 4 特色服务 （1）提供介质筛选及工艺开发的咨询。 （2）接受客户委托开发各种分离介质和分离工艺。 （3）按客户要求提供各种规格的预装柱。 （4）为客户提供专业的售前和售后服务。