第一章1-6噬菌体载体.pdfVIP

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2019-05-10 发布于浙江
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第一章1-6噬菌体载体.pdf

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第一章 3、λ噬菌体载体的优缺点：第一章分子克隆的工具酶和载体 • 优点：包装的λ噬菌体感染大肠杆菌要比分子克隆的工具酶和载体质粒转化细菌的效率高。 • 缺点：λ噬菌体载体的克隆操作要比质粒 • 第八节噬菌体载体 • 第八节噬菌体载体载体复杂。 • 一、 λ噬菌体 • 一、 λ噬菌体 • 用途：λ噬菌体载体比质粒载体能插入的 • （一）λ噬菌体 DNA长得多，常用于构建cDNA文库或基因 • （一）λ噬菌体 • （二）λ噬菌体载体的改造组文库。 • （二）λ噬菌体载体的改造 • （三）λ噬菌体载体举例 Lambda gt10 Lambda gt10 （三）λ噬菌体载体举例概述： • Lambda gt10是一种插入载体。 • Lambda gt10 • Lambda gt10 • 在噬菌体阻遏基因cI 内有单一的EcoR Ⅰ克隆 • Lambda gt11 • Lambda gt11 位点。用于插入小的cDNA片段(约6kb)，构 • EMBL3和EMBL4 建cDNA文库或基因文库。 • 该载体克隆效率很高。 • 在构建cDNA文库时，利用Oligo(dT)或随机引物合成的cDNA经过EcoR Ⅰadaptors或 Linkers修饰后，就可以和λgt10连接起来。 • 克隆到λgt10的噬菌体，可用核酸探针进行筛选。 10 Lambda gt 10 map Lambda gt map 宿主： • 建议用C600 and C600hf1作受体菌。筛选： • 如果有外源DNA插入，cI基因失活，该噬菌体进入裂解生长途径，在培养皿形成噬菌斑。反之，若无插入，cI基因表达，噬菌体进