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- 2019-05-14 发布于上海
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绿鳍马面鲀性类固醇激素受体在生殖周期中的表达机制
绿鳍马面鲀性类固醇激素受体在生殖周期中的表达机制
绿鳍马面鲀性类固醇激素受体在生殖周期中的表达机制
摘 要
绿鳍马面鲀(Navodon septentrionalis)是我国的重要经济鱼类,本研究以烟 台百佳水产公司人工养殖的绿鳍马面鲀为研究对象,对其进行为期一年的周期采 样。运用免疫组织化学和性类固醇激素放射免疫测定法,对绿鳍马面鲀的性腺和 血清性类固醇激素进行了深入研究和分析,并采用分子生物学方法对绿鳍马面鲀 性类固醇激素受体进行了基因克隆与表达分析,得出结果与结论如下:
1 绿鳍马面鲀性腺的免疫组织化学观察
对绿鳍马面鲀进行为期一年的隔月采样。对绿鳍马面鲀性腺中雌激素受体 α
(ERα)和雄激素受体(AR)进行了定位,发现在卵巢、精巢发育的不同阶段 均存在两种受体的不同程度的表达。在卵巢中,ERα 在卵母细胞早期发育阶段呈 强的免疫阳性反应,而随着卵母细胞的成熟,AR 免疫反应逐渐增强,这都说明 雌激素及其受体对卵巢发育早期阶段起着关键作用,但雄激素及其受体对卵巢的 作用机制尚不明确;精巢中的 ERα 和 AR 在精子发生各个时期的间质细胞处均 有强阳性反应,在生殖细胞处 ERα 较 AR 有更高水平的表达,这说明雌激素及 其受体对精巢的发育成熟起到关键作用,雄激素及其受体对生殖细胞的发育、成 熟和维持也起着重要作用。
2 绿鳍马面鲀 ERs 基因的克隆与时空表达分析
本实验首次克隆到绿鳍马面鲀三种 ERs 基因:ERα cDNA 核心序列共 1410bp,编码 470 个氨基酸;ERβ1 cDNA 全长 2192bp,包含一个开放阅读框, 编码 565 个氨基酸;ERβ2 cDNA 全长 2363bp,包含一个开放阅读框,可以编码 662 个氨基酸。利用生物学软件将绿鳍马面鲀 ERs 的氨基酸序列与其它硬骨鱼类 及哺乳动物等进行多序列比对,发现了 ERs 的一些共有的结构特点,也发现了 绿鳍马面鲀 ERs 的一些特点。本实验采用 RT-PCR 方法,检测了 ERs 在性成熟 雌、雄鱼中 11 种组织中的分布情况,结果表明,绿鳍马面鲀 ERs 在雌鱼各组织
I
中较雄鱼的表达更广泛,包括一些非生殖组织,如鳃、肾脏和脾脏等都检测到
mRNA 表达,特别是绿鳍马面鲀 ERβ1 只在雄鱼性腺组织中检测到表达,其他组 织均未检测到表达信号。此外,结合血清 E2、T 及 GSI 的周年变化,对 ERs 在 性腺中的周年表达情况进行了分析,发现绿鳍马面鲀 ERs 与血清 E2 和 GSI 都呈 现出一定的相关性,这表明 E2 和 ERs 可能影响性腺的发育成熟。
3 绿鳍马面鲀 AR 基因的克隆与时空表达分析
本实验首次克隆到绿鳍马面鲀 AR 部分基因序列,得到 AR cDNA 核心序列 共 769bp,共编码 256 个氨基酸。利用生物学软件将该片段推导得到的氨基酸序 列与其它硬骨鱼类及哺乳动物等进行多序列比对,发现了该序列结构上的一些特 点。本实验采用 RT-PCR 方法,检测了 AR 基因在性成熟雌、雄鱼 11 种组织中 的分布情况,结果表明,该基因在雄鱼各组织中均有表达,仅在雌鱼的一些组织 中检测到表达信号,且在雄鱼各组织中的表达丰度高于雌鱼,并认为 AR 与 ARβ 更为接近。此外,结合血清 T 分析了 AR 在性腺组织中的周年变化情况,发现该 基因的转录水平与繁殖周期和血清 T 的含量存在密切关系。 关键词:绿鳍马面鲀;性腺;性类固醇激素;ER;AR
II
The expression mechanism of the sex steroid ho
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