第2-2章凝胶电泳及PCR技术.pdf

第2章 凝胶电泳及PCR技术 徐飞 武汉生物工程学院 Tel: 02789645439 qq: 290597453 每周要闻 沈阳农大育成具有自主知识产权的草莓新品种 • 据介绍，沈阳农业大学自1954年开始草莓新品种 选育研究，近来年重点开展选育综合日本品种和欧 美品种优点的草莓新品种。通过杂交育种的手段选 育出的草莓新品种 “艳丽”，于2014年获得自主 知识产权。 • 目前“艳丽”草莓已在多地栽 培，结果表明其具有果形漂亮 、光泽度好、品质优良、植株 健壮抗病等特点。 上期回顾 1、质粒DNA的结构特点 独立与核DNA 自主复制 环状 其它 以外 2、质粒DNA的提取原理 质粒DNA与核DNA的 结构差异 变性与复性 时间不同 3、DNA提取易犯错误及原因分析 2.1.3 凝胶电泳技术 DNA检测 凝胶电泳槽 凝胶成像系统 什么是电泳？  电泳是指带电颗粒在电场的作用下发生迁移的过程。 许多重要的生物分子，如氨基酸、多肽、蛋白质、核 苷酸、核酸等都具有可电离基团，它们在某个特定的 pH值下可以带正电或负电，在电场的作用下，这些 带电分子会向着与其所带电荷极性相反的电极方向移 动。 凝胶电泳技术 凝胶电泳： 是一大类技术，被科学工作者用 于分离不同物理性质（如大小、形状 、等电点等）的分子。 凝胶电泳通常用于分析用途，如 核酸的质量和纯度等。 但也可以作为制备技术，如聚合 酶链式反应(PCR)、克隆技术、DNA 测序或者免疫印迹检测之前部分提纯 分子。 常用的凝胶电泳有两类：  琼脂糖凝胶电泳：分辨率稍低。 常用于分离DNA、RNA等核酸分子  聚丙烯酰胺凝胶电泳：分辨率高。 常用于分离蛋白质等大分子 电泳基本流程 提问 1. 凝胶电泳的原理是什么？ 2. 为什么在凝胶成像系统里 面可看见DNA条带？ 3. 点样的正确握移液器的方 法是什么？ 溴化乙啶 ethidium bromide 缩写：EB • 分子式：C21H20N3·Br • 分子质量：394.31 溴化乙锭是一种高度灵敏的荧光 • 熔点：260-262℃ 染色剂,用于观察琼脂糖和聚丙烯 • 外观：深红色结晶或粉末 酰胺凝胶中的DNA • 特性：纯度(无水)(%)：>98.0 • 溶解性：溶于水(10mg/ml)，磁力搅拌数小时以确 保其完全溶解，然后用铝箔包裹容器或转移至棕 色瓶中，室温保存。 • 储存条件：室温避光保存 • 毒性：强致癌物质 影响凝胶电泳迁移率的因素 1、分子大小 线状双链DNA分子长度 （碱基对数目bp ）的 对数（log10 ）