单元(扩充)繁殖生物技术资料.pptVIP

单元（扩充） 繁殖生物技术 Bio-Tec of Reproduction 第一节 体外受精 第二节 发情控制 第三节 其它繁殖生物学技术 第一节 体外受精 体外受精是指卵母细胞与精子在体外融合，形成合子的过程。体外受精成功的标志是通过移植产生后代。 卵母细胞：体内；体外 精子：体外获能 一、卵母细胞 1、体内成熟卵母细胞 1）超数排卵：（略，胚胎移植讲） 2）卵母细胞采集 ：在内窥镜的导引下，穿刺成熟卵 泡，从卵泡中抽吸卵泡液和成熟卵母细胞。 3）镜检：将吸取的卵泡液及卵母细胞置于评皿中，在 体视显微镜下（25X）， 选则合格的卵母细胞，用 于体外受精。 合格卵母细胞标准：放射 冠细胞扩散良好，质地均 一，放射冠细胞间透明； 透明带清晰；卵母细胞圆 形，直径大小适中，细胞 质质地均匀，色泽柔和， 透明度适中（图－1）。 2、体外成熟的卵母细胞 1）卵母细胞来源 （1）卵巢来源：从屠宰 场宰杀的母畜获得卵巢， 38 °C生理盐水中保温， 宰杀后 2 小时内运回实 验室。 （2）采集卵母细胞－卵丘细胞复合物：用 38 °C 生理盐水洗涤卵巢 2 次，左手持卵巢，右手持注射器，如图所示，抽取 3－5mm 卵泡 的卵泡液及卵母细 胞－卵丘细胞复合 物，置于20ml试管 内，静置待检。 选择 3－5 mm 卵泡的原因是：更 大卵泡的闭锁比例 可能例高，更小卵 泡的发育程度可能 低。 生理盐水配方：NaCl 18g，Mill-Q（或三蒸水）2l， 青霉素2,000,000IU，链霉素2g。 （3）镜检卵母细胞－卵丘复合物：用吸管吸取经静置 后试管底部的混合物于平皿中，用吸管铺平，在实体显微镜下用吸管检出卵母细胞－卵丘复合物，置于另一平皿中，用洗涤液在实体显微镜下洗涤2次，在洗涤过程中要剔除不合格的卵母细胞－卵丘复合物。选择合格的卵母细胞－卵丘复合物非常重要，否则将降低卵母细胞的成熟比例。 卵母细胞－卵丘复合物分类标准 a、分类依据：卵母细胞的直径、形状、质地的均匀度、色泽；透明带的完整性；卵丘细胞围绕卵母细胞的完整性、数量、扩散程度、色泽。 一般分为4级，1、2级为合格；3、4级为不合格。 一级：卵母细胞：直径120μm，圆形，质地均匀。 卵丘细胞：包围卵母细胞数层、紧密、完整， 质地均匀。 二级：卵母细胞：直径120μm，圆形，质地均匀。 卵丘细胞：包围卵母细胞数层、紧密，但不完 整，质地均匀。 三级：卵母细胞：直径太大或太小，椭圆形，质地均 匀。 卵丘细胞：包围卵母细胞单层或无、不紧密、 不完整，质地均匀。 四级：卵母细胞：直径太大或太小，椭圆形，质地不 均匀。 卵丘细胞：包围卵母细胞单层或无、不紧密、 不完整，质地不均匀。 （4）卵母细胞－卵丘复合物体外成熟 体外成熟大多采取液滴或试管培养。液滴培养的 优点是培养液不蒸发，渗透压稳定，缺点是培养液中 的脂溶性物质能溶于覆盖的石蜡油；试管培养的缺点是培养液容易蒸发而致渗透压提高。一般来说，采用液滴培养普遍，因此，这里介绍液滴培养。 a、制作体外成熟培养液滴 在一次性利用的平皿（3－6cm）中，用加样器整 齐、小心地加入液滴（大多采用50μl液滴），然后用 石蜡油覆盖，在CO2培养箱中平衡2小时（图－3）。 b、培养 牛：在平衡后的每个液滴中用吸管加入5－10个卵母细胞－卵丘复合物， 39 °C