碱性磷酸酶标记的链霉亲和素－生物素法SAP法.PPT

实验步骤 1、石蜡切片脱蜡至水，PBS洗3×3min； 2、3%H2O2室温孵育10min，以消除内源性过氧化 物酶的活性；蒸馏水洗，PBS浸泡5min； 3、滴加适当比例稀释的胰岛素一抗工作液， 37℃ 孵育1hr； 4、 PBS冲洗，3×3min； 5、 滴加HRP标记羊抗小鼠Ig多聚体，37℃或室温孵 育20～30min； 6、 PBS冲洗，3×3min； 7、显色剂显色（AEC或DAB）； 8、自来水充分冲洗，封片。 结果：胰岛内可见棕色着色的阳性细胞，阳性产物见于细胞质。 * * 碱性磷酸酶标记的链霉亲和素－生物素法（SAP法） 免疫组织化学实验二 实验材料 1、小鼠胰腺的石蜡切片； 2、胰岛素抗体（鼠抗人单克隆抗体）； 3、SAP检测试剂盒； 4、正常羊血清； 5、 0.01M PBS（pH7.2～7.6） ； 6、BCIP/NBT显色试剂； 7、孵育湿盒。 实验原理 ABC法 SAP法 实验方法或步骤 1、石蜡切片脱蜡至水，蒸馏水洗，PBS浸泡2min；(如需采用 抗原修复，可在此步后进行)。 2、10％正常羊血清封闭，室温孵育10min； 3、倾去血清，勿洗，滴加适当比例稀释的胰岛素一抗或一抗工 作液，37℃孵育45min。 PBS冲洗，3×3min；