Wates-e2695型高效液相色谱仪操作规程.pdfVIP

Waters e2695 型高效液相色谱仪操作规程 目的：建立Waterse2695高效液相色谱仪标准操作规程，为了使操作者操作高效液相色谱仪 更规范，保证实验结果更精确。 范围：适用于Waterse2695高效液相色谱仪操作和维护保养。 职责: 新药研发部人员、QC人员对本规程的实施负责。 1 开机前的准备工作 1.1 检查设备电源、流路、信号连接是否完好。 1.2 流动相：配制相应的流动相，经0.45µm微孔滤膜抽真空过滤后，并超声脱气5分钟， 必须使用色谱纯的溶剂，水或缓冲盐溶液要用超纯水；盛放溶液和流动相所用的玻璃容器必 须用超纯水清洗。 1.3 样品溶液：按方法取样或配制标准样品溶液，0.45µm滤膜过滤。 2 仪器的组成及开机平衡系统 2.1 仪器组成。本仪器由waterse2695分离单元、2489紫外可见光检测器、Empower色谱 工作站和打印机组成。2695分离单元包括四元梯度洗脱的溶剂输送系统，四通道在线真空 脱气机，可容纳120个样品瓶的自动进样系统，柱温箱，内置的柱塞密封垫清洗系统，溶剂 托盘，液晶显示器，键盘用户界面及软盘驱动器。 2.2 开机。先打开电脑，依次接通 2695 分离单元、检测器、计算机和打印机的电源。接 通 2695 分离单元后，约 20s 仪器开始自检，约 1min 后，显示主屏幕，此时继续各部件 的初始化，待主屏幕上方标题区出现“ Idle ”时，仪器进入待命状态。 2.3 脱气（Degasssger）。按面板右下方“Menu/Status”键进入“Status（1）”界面， 移动光标至“Degasser Mode”，按Enter选择“On”，打开在线脱气。一般默认是开的。 2.4 设定柱温及样品室温度（可选项）。在“Status”界面，光标至“Col Htr Set”，输 入目标温度，按Enter；光标移至“Sample”,选择目标温度（4℃-40℃），按“Enter”。 （可在工作站方法中设置） 2.5 灌注柱塞密封清洗泵（PrimeSealWash）。在主屏幕下，按“Diag”，显示“Diagnosties” 屏幕，按“Prime Seal Wash”,显示“Prime Seal Wash”屏幕，按“Start”,直到清洗溶 剂流出泵杆密封圈冲洗废液管，依次按“Halt”、“Close”、“Exit”。 2.6 灌洗针头清洗泵（PrimeNeedleWash）。在主屏幕下，按“Diag”，显示“Diagnosties” 屏幕，按“Prime Ndl Wash”,显示“Prime Needle Wash”屏幕，按“Start”,30s内应见 溶剂从废液排放口流出，按“Close”、“Exit”；若想要多清洗几次时，请按“Start Again”。 2.7 湿灌注（WetPrime）。在“Status(1)”界面中“Composition”下，选择将用到的溶 剂通道为“100%”，按液晶屏幕右下角“DirectFunction”键，移动光标选择“WetPrime”， “OK”，流速及时间可使用默认值，也可自行设定（如：5ml/min，3min），“OK”即可。 将每一个会用到的溶剂通道按照上述操作一次。（也可各通道选25% 5ml/min，3min）。 2.8 冲洗进样器（PurgeInjector）。按“Menu/Status”进入“Staus(1)”画面，在设定 溶剂画面中设定适当的流速与溶剂比例（针对缓冲盐或离子对试验，建议设定50%乙腈：50% 水的溶剂来清洗进样器），按“DirectFunction”键，选择“PurgeInjector”，“OK”， 默认数值为6，“OK”。 注：以上2.5-2.8为溶剂系统前处理过程，建议每天开机后依次进行。若发现注射器中 有气泡，则可重复2.8直至排除。 2.9 平衡柱子。在“Status”界面上，按流动相比例设定各通道溶剂比例后，再WetPrime 操作一次，然后设置流速，平衡色谱柱30-60min。（可在工作站中设置）。 3 3 33 编辑仪器方法和方法组 3.1 打开电脑后，双击桌面上的Empower，输入用户名system、密码manager ，选择“运行 样品”。 3.2 新建仪器方法。进入“运行样品”后，选择“创建方法组”调用方法组编辑向导。出现“新 建方法组—选择仪器方法”，单击“新建”来创建新的仪器方法，此时出现“仪器方法编辑器” 界面，按相关的要求填写各参数，根据需要编辑不同的方法，编辑完毕后单击“文件”，“另存 为”后出现“保存仪器方法”对话框，输入此