芒果苷改善高果糖所致HepG2细胞内甘油三酯沉积的作用机制研究-细胞生物学专业毕业论文.docxVIP

重庆医科 重庆医科大学硕士研究生学位论文 万方数据 万方数据 英汉缩略语名词对照 英文缩写 英文全称 中文全称 ACC-1 acetyl-CoA carboxylase 乙酰-CoA 羧化酶 BCA bicinchoninic acid 聚氰基丙烯酸正丁酯 cDNA Complementary deoxynucleic acid 互补脱氧核糖核酸 ChREBP carbohydrate response element binding protein 碳水化合物反应元件结 合蛋白 Con Control 对照组 DMSO Dimethyl sulfoxide 二甲基亚砜 DGAT-2 diacylglycerol acyltransferase-2 二脂酰甘油酰基转移酶 2 DEPC diethypyrocarbonate 焦碳酸二乙酯 FAS fatty acid synthase 脂肪酸合成酶 FBS fetal calf serum 胎牛血清 Fru fructose 果糖 HepG2 human hepatoma cells 人肝肿瘤细胞 LPK liver pyruvate kinase 肝型丙酮酸激酶 LSD Least Significant Difference 最小显著性差异法 MTT 3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl- 2-H-tetrazolium bromide 3-（4，5-二甲基噻唑-2） -2，5-二苯基四氮唑溴盐 mRNA Messenger RNA 信使 RNA NAFLD non-alcoholic fatty liver disease 非酒精性脂肪肝病 PCR Polymerase Chain Reaction 聚合酶链式反应 PBS Phosphate Buffered Saline 磷酸盐缓冲液 PMSF Phenylmethanesulfonyl fluoride 苯甲基磺酰氟 SREBP-1c sterol regulatory element binding protein-1c 固醇调节元件结合蛋白 1c TG triglyceride 甘油三酯 1 Trizol Total RNA Isolation 异硫氰酸胍 2 芒果苷改善高果糖所致 HepG2 细胞内甘油三酯 沉积的作用机制研究 摘要 目的：非酒精性脂肪肝是非酒精性脂肪肝病的标志，可发展成为 严重的肝病，近年来发病率持续上升，严重危害国民身体健康，但是 对于非酒精性脂肪肝目前尚无针对性的化学合成药物，而中医药却在 越来越多的临床应用中凸显了优势。 芒果苷是一种从传统中草药提取的活性成份，广泛被用于抗炎抗 病毒、抗肿瘤、糖尿病、肥胖等疾病，但其作用机理尚不清楚。本实 验采用人肝癌细胞株 HepG2 细胞模型研究芒果苷对高果糖诱导的肝细 胞甘油三酯沉积的作用及机制，旨在为芒果苷防治非酒精性脂肪肝提 供理论依据。 方法：DMEM 低糖(1g/L 葡萄糖)条件下培养的 HepG2 细胞分为对 照组(1g/L 葡萄糖，无果糖)、果糖组(1g/L 葡萄糖+30mmol/L 果糖)、果 糖+芒果苷组(同时加入葡萄糖浓度 1g/L+30mmol/L 果糖+不同剂量的 芒果苷，使其药物终浓度分别为 6.25 μmol/L、12.5 μmol/L、25 μmol/L、 50 μmol/L、100 μmol/L、200 μmol/L)，药物干预 24h 之后，MTT 试验 寻找最适药物浓度范围，在最适药物浓度范围下，油红 O 染色法观察 细胞内脂滴的沉积情况，甘油三酯酶法测定细胞内甘油三脂(TG)的含 量，Real-time PCR 检测碳水化合物反应元件结合蛋白(ChREBP)、固醇 3 调节元件结合蛋白 1c(SREBP-1c)、肝型丙酮酸激酶（LPK）、二脂酰甘 油酰基转移酶 2（DGAT-2）mRNA 表达的变化。采用 SPSS19.0 统计分 析软件对所有数据进行处理，以均值±标准误(?x±s)表示，多组均数比 较采用单因素方差分析，各组间两两多重比较采用 LSD 检验，P0.05 表示差异有统计学意义。 结果： 1.MTT 结果显示当芒果苷的浓度低于 50 μmol/L 时，细胞活力几乎 不受影响，当芒果苷浓度高于 50 μmol/L 时，随着药物浓度的升高，细 胞的活力明显下降，所以为了排除药物毒性对细胞活性的影响，我们 后续试验采用 50 μmol/L 以下浓度的芒果苷进行实验。 2.油红 O 染色结果显示，与对照组相比，果糖组细胞内的脂滴数 量明显增多；较低剂量的芒果苷(6.25 μmol/L 和 12.5 μmol/L)对果糖导 致的细胞内脂滴的沉积无